PLK1在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)變化及其作用機(jī)制研究.pdf

1、PLK1(Polo—like kinase 1)是調(diào)控中心體成熟、染色體分離和有絲分裂退出的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。PLK1對于維持有絲分裂過程中基因組穩(wěn)定性非常重要，在多種惡性腫瘤中發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)室在前期工作中發(fā)現(xiàn)PLK1基因所在的16p12染色體區(qū)帶在食管鱗癌中存在增益，本研究旨在探討PLK1在食管鱗癌中的表達(dá)變化及其參與該病發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制。 首先采用免疫組化方法檢測了PLK1在155例食管鱗癌中的表達(dá)及與腫瘤臨床病理

2、參數(shù)之間的關(guān)系，繼而通過RNAi降低PLK1的表達(dá)，觀察其對食管鱗癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響，采用免疫共沉淀和激光共聚焦方法確定PLK1的相互作用蛋白。 結(jié)果表明，與相應(yīng)的正常上皮相比，PLK1在71.6％的人食管鱗癌組織中表達(dá)明顯升高。PLK1過表達(dá)與區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.001)和腫瘤分期(P=0.033)密切相關(guān)。PLK1表達(dá)陽性患者的術(shù)后生存時(shí)間顯著短于PLK1表達(dá)陰性的患者(P=0.001)。而且，多因素生存分析顯示PL

3、K1是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素(RR=4.921，P=0.011)。通過熒光原位雜交(FISH)檢測食管鱗癌中PLK1基因的擴(kuò)增情況，發(fā)現(xiàn)37.5％的標(biāo)本中包含PLK1基因的RP11—141E3位點(diǎn)發(fā)生了拷貝數(shù)的增加，說明基因擴(kuò)增是PLK1在部分食管鱗癌組織中過表達(dá)的原因之一。 通過RNA干擾降低PLK1的表達(dá)，能顯著抑制食管鱗癌細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。PI染色和流式細(xì)胞儀檢測表明，與對照組相比PLK1—RNAi組出現(xiàn)明顯的凋亡

4、峰，并呈時(shí)間依賴性增強(qiáng)。抑制PLK1表達(dá)導(dǎo)致線粒體膜電位降低、caspase—9和caspase—3活化、以及下游多聚ADP核糖聚合酶(PARP)降解，同時(shí)表現(xiàn)線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白Mcl—1和Bcl—2蛋白水平下降。免疫共沉淀和激光共聚焦分析結(jié)果顯示PLK1在細(xì)胞內(nèi)分別與survivin和α—catenin形成復(fù)合物。PLK1敲降導(dǎo)致survivin蛋白表達(dá)降低。 以上結(jié)果表明PLK1可能在細(xì)胞凋亡、分化、粘附和遷移中發(fā)揮作用