加味四逆散及拆方對肝星狀細(xì)胞JAK2-STAT3信號通路影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察研究加味四逆散及其拆方藥物血清對肝星狀細(xì)胞（HSC-T6）JAK2-STAT3信號通路的影響，探討加味四逆散及拆方抗肝纖維化作用機(jī)理，分析研究不同藥組影響肝纖維化的靶位，為選擇針對不同靶位最有治療優(yōu)勢的藥物，重新組合成更優(yōu)化的抗肝纖維化中藥復(fù)方提供依據(jù)。
　　 方法：加味四逆散全方及其拆方藥物煎劑給大鼠灌胃7d；制備各含藥血清；培養(yǎng)肝星狀細(xì)胞；用瘦素刺激HSC-T6使其增殖；蛋白印跡試驗(yàn)檢測各藥物血清對增殖后的肝星狀細(xì)

2、胞（100ng/ml的瘦素刺激HSC-T6）JAK2-STAT3蛋白表達(dá)的影響效果。
　　 結(jié)果：⑴加味四逆散全方藥物血清對增殖后的肝星狀細(xì)胞（下同）作用6、12、24h后JAK2表達(dá)的影響結(jié)果顯示，加味四逆散組的蛋白條帶顏色較正常血清對照組淺，JAK2表達(dá)明顯降低；6h與 12h、24h三個(gè)時(shí)段JAK2表達(dá)的蛋白條帶顏色無明顯差異，顯示加味四逆散藥物血清能明顯降低JAK2蛋白表達(dá)水平；⑵加味四逆散全方藥物血清對肝星狀細(xì)胞作用6

3、、12、24h后STAT3表達(dá)的影響結(jié)果顯示，加味四逆散組藥物血清作用6h后，蛋白條帶顏色開始變淺，STAT3水平逐漸降低，至24hSTAT3蛋白表達(dá)水平降到最低，與正常對照組比較降低明顯，顯示加味四逆散藥物血清能明顯降低STAT3蛋白表達(dá)水平；⑶加味四逆散組、秋水仙堿組、正常血清組各藥物血清對肝星狀細(xì)胞作用12h 后，其STAT3蛋白表達(dá)的蛋白條帶顏色與正常血清對照組比較明顯變淺，有顯著性差異：而加味四逆散組與秋水仙堿組蛋白條帶顏色相

4、比未見明顯差異，顯示加味四逆散藥物血清能明顯降低STAT3蛋白表達(dá)水平；⑷疏肝藥物組、活血藥物組、健脾藥物組各藥物血清對肝星狀細(xì)胞作用12h后，JAK2，STAT3表達(dá)的結(jié)果顯示，拆方藥物血清三組與正常血清對照組蛋白條帶顏色相比，均明顯變淺，有顯著性差異；拆方藥物血清三組與秋水仙堿組蛋白條帶顏色比較未見明顯差異；拆方三組與加味四逆散全方組相比蛋白條帶顏色稍深，顯示其降低JAK2，STAT3表達(dá)的效果不如加味四逆散全方；拆方三組之間蛋白條

5、帶顏色略存在著差異，疏肝組淺于活血組淺于健脾組，顯示拆方三組藥物血清均能降低JAK2，STAT3表達(dá)的水平，但疏肝組優(yōu)于活血組優(yōu)于健脾組。
　　 結(jié)論：①加味四逆散全方及其拆方各組藥物均有降低增殖后的肝星狀細(xì)胞（瘦素刺激HSC-T6）JAK2、STAT3蛋白的表達(dá)，抑制JAK2-STAT3信號通路信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用，說明加味四逆散全方及其拆方各組藥物抗肝纖維化的主要作用之一可能是通過降低JAK2、STAT3蛋白表達(dá)，阻斷JAK2-S