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文檔簡(jiǎn)介
1、HLA(human leukocyte antigen)系統(tǒng)是迄今所知人類多態(tài)性最為豐富的遺傳系統(tǒng)。其中經(jīng)典HLAI類基因包括HLA-A,-B,-C,是基因多態(tài)性最高的區(qū)域,其編碼的經(jīng)典HLAI類分子普遍表達(dá)于有核細(xì)胞表面。
CTL和NK細(xì)胞是腫瘤免疫中最重要的兩類效應(yīng)細(xì)胞,其發(fā)揮免疫效應(yīng)均需要經(jīng)典HLAI類分子介導(dǎo)。一方面,細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面HLA-肽復(fù)合體,啟動(dòng)免疫應(yīng)答殺傷腫瘤細(xì)胞(T細(xì)胞的MH
2、C限制性)。研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞存在經(jīng)典HLAⅠ類分子表達(dá)下調(diào)或缺失,以逃避CTL免疫殺傷。另一方面,NK細(xì)胞表面抑制性KIR分子識(shí)別經(jīng)典HLAI類分子,抑制NK細(xì)胞活性。一旦腫瘤細(xì)胞表面經(jīng)典HLAⅠ類分子表達(dá)下調(diào)或丟失,NK細(xì)胞被活化,發(fā)揮免疫殺傷效應(yīng)(“missing-self”理論)。
因此,腫瘤細(xì)胞要逃避CTL殺傷,需要下調(diào)經(jīng)典HLAI類分子表達(dá);而要逃避NK細(xì)胞的殺傷,則要上調(diào)經(jīng)典HLAⅠ類分子表達(dá)。那么,腫瘤細(xì)胞
3、是如何調(diào)節(jié)其表面經(jīng)典HLAⅠ類分子表達(dá),同時(shí)逃避CTL和NK細(xì)胞的雙重殺傷?
肝臟中,NK細(xì)胞占淋巴細(xì)胞總數(shù)的30%。高于外周血中5~10%。因此肝臟腫瘤細(xì)胞要應(yīng)對(duì)更多來(lái)自CTL和NK細(xì)胞的雙重選擇壓力。鑒于此,我們以原發(fā)性肝細(xì)胞癌為研究對(duì)象,探討肝癌細(xì)胞是否存在一種選擇性調(diào)節(jié)經(jīng)典HLAⅠ類分子表達(dá)的免疫逃避機(jī)制?即上調(diào)或者維持NK細(xì)胞抑制性KIR受體所對(duì)應(yīng)配體經(jīng)典HLAI類分子的表達(dá),抑制NK細(xì)胞活性,而同時(shí)下調(diào)其他經(jīng)典
4、HLAⅠ類分子的表達(dá),減少抗原遞呈逃避CTL殺傷?
我們首先設(shè)計(jì)經(jīng)典HLAⅠ類等位基因特異性定量PCR引物,以南京地區(qū)肝癌患者為研究對(duì)象,進(jìn)行KIR和經(jīng)典HLAⅠ類基因分型。根據(jù)經(jīng)典HLAⅠ類基因分型結(jié)果選擇對(duì)應(yīng)的定量PCR引物,從mRNA水平分析同一個(gè)體肝癌組織相對(duì)其癌旁組織經(jīng)典HLAⅠ類等位基因表達(dá)水平的變化,并結(jié)合KIR基因分型結(jié)果組合分析,初步探討肝癌細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制。研究結(jié)果如下:
(1)通過(guò)PC
5、R-SBT方法,分別完成HLA-A,-B,-C基因分型46、47、39例,其中包括6例細(xì)胞系(HepG2、NK92、THP-1、KB、BR、293T)作為陽(yáng)參。PCR-SSP方法完成38例肝癌標(biāo)本KIR基因分型。
(2)完成經(jīng)典HLAⅠ類等位基因特異性定量PCR引物的設(shè)計(jì)和驗(yàn)證,最終得到7對(duì)HLA-A引物,覆蓋全部HLA-A等位基因;7對(duì)HLA-B引物,覆蓋人群中分布頻率大于3%的所有HLA-B等位基因。
(
6、3)完成32例肝癌患者(癌和癌旁組織)128條HLA-A等位基因mRNA表達(dá)水平的定量分析,癌組織相比其癌旁統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),HLA-A等位基因上調(diào)表達(dá)占34%,表達(dá)一致為39%,下調(diào)表達(dá)為27%。
(4)結(jié)合KIR基因型統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),在KIR基因型為AA的個(gè)體中,肝癌相對(duì)癌旁HLA-A表達(dá)下調(diào)的比例為47%,高于基因型為BX個(gè)體中的19%,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02)。同時(shí),KIR-AA基因型個(gè)體HLA-A11表達(dá)下調(diào)比例為67%
7、,而KIR-BX為0,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.01)。
綜上所述,我們?cè)O(shè)計(jì)完成經(jīng)典HLAⅠ類等位基因特異性定量PCR引物,解決經(jīng)典HLAⅠ類等位基因mRNA水平定量分析的關(guān)鍵問(wèn)題。32例肝癌及癌旁組織HLA-A等位基因定量分析,結(jié)合KIR基因型統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),AA基因型個(gè)體相比BX基因型,HLA-A更傾向于下調(diào),其中HLA-A11下調(diào),可能有助于肝癌逃避NK和CTL的雙重殺傷。
HLA基因的高度多態(tài)性,導(dǎo)致每一等位基
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