轉(zhuǎn)WAM1擬南芥對(duì)小菜蛾生長(zhǎng)發(fā)育及腸道菌群的影響.pdf

1、小菜蛾腸道菌群在其生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中扮演者重要的角色。本研究通過(guò)將來(lái)自于尤金袋鼠(Macropus eugenii)的抗菌肽基因WAM1導(dǎo)入擬南芥中，研究其對(duì)小菜蛾生長(zhǎng)發(fā)育及其腸道菌群的影響，取得如下成果:
　　通過(guò)人工合成WAM1基因，并優(yōu)化其密碼子為擬南芥偏愛(ài)的，將其與植物表達(dá)載體pSR784d連接，構(gòu)建重組植物表達(dá)載體WAM1-pSR784d，并遺傳轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌LBA4404。通過(guò)花絮侵染法遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥，經(jīng)過(guò)除草劑Basta

2、初步篩選獲得6株表現(xiàn)型為陽(yáng)性的植株。
　　PCR檢測(cè)，6個(gè)株系中均可檢測(cè)出WAM1基因條帶，初步確定為轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株，分別命名為WAM1-A、B、C、D、E、F;RT-PCR檢測(cè)，WAM1基因在6個(gè)擬南芥株系中均表達(dá)，其中WAM1-C表達(dá)量最高，并且極顯著高于其他株系。
　　生測(cè)實(shí)驗(yàn)表明，取食WAM1-C的小菜蛾的第四齡期極顯著長(zhǎng)于取食其他株系的小菜蛾，在蛹期和成蟲(chóng)期各處理之間無(wú)顯著差異;取食轉(zhuǎn)WAM1擬南芥的小菜蛾均降低重

3、，其中取食WAM1-C的小菜蛾達(dá)到極顯著水平，蛹重?zé)o顯著差異。通過(guò)對(duì)小菜蛾腸道菌群的16S rDNA測(cè)序表明，小菜蛾腸道菌群優(yōu)勢(shì)菌為厚壁菌門(mén)和變形菌門(mén)，取食野生型擬南芥與轉(zhuǎn)入空載pSR784d其腸道菌群結(jié)構(gòu)在門(mén)和科級(jí)水平均類(lèi)似，說(shuō)明未攜帶目的基因的T-DNA片段不對(duì)小菜蛾腸道菌群產(chǎn)生影響，取食WAM1-C的小菜蛾的腸道菌群在門(mén)的分類(lèi)水平上差異較小，但在科的分類(lèi)水平上差異較大，其中腸桿菌科的豐度由48.67％降到38.93％，黃單胞菌科的