小檗堿對糖尿病大鼠胃腸神經(jīng)系統(tǒng)損傷的改善作用及相關(guān)機制.pdf

1、目的:探討糖尿病早期大鼠離體胃平滑肌收縮、舒張反應(yīng)的改變，以及小檗堿對糖尿病大鼠胃平滑肌神經(jīng)功能的改善和作用機制。
　　方法:體重為200g雄性SD大鼠，分為五組，即正常對照組、糖尿病模型組、模型高劑量灌胃給藥組、模型低劑量灌胃給藥組和模型腹腔注射給藥組。大鼠禁食12h后，腹腔注射1％鏈脲佐菌素(STZ，65mg·kg-1)溶液誘導(dǎo)大鼠糖尿病模型。模型給藥組于腹腔注射STZ并造模成功2周后，高、低劑量灌胃給藥組分別灌胃給予200、

2、100mg·kg-1小檗堿;腹腔注射給藥組腹腔注射20mg·kg-1小檗堿，每日給藥1次，連續(xù)2周。采用離體器官肌張力分析方法，以電場刺激及藥理學(xué)激動劑誘發(fā)胃各部位平滑肌收縮、舒張反應(yīng)，并應(yīng)用工具藥干預(yù)神經(jīng)遞質(zhì)的活動，觀察糖尿病早期大鼠離體胃平滑肌功能的損傷，分析神經(jīng)源性收縮、舒張反應(yīng)中膽堿能、氮能和嘌呤能神經(jīng)成分的變化;探討小檗堿不同給藥途徑對糖尿病大鼠離體胃平滑肌神經(jīng)功能的影響，分析可能的作用機制。
　　結(jié)果
　　1糖尿

3、病早期大鼠的體征及離體胃平滑肌功能的改變
　　1.1糖尿病大鼠體征、血糖水平及胃的表觀變化
　　與同周齡正常大鼠相比，糖尿病大鼠飲水和排尿明顯增多，毛色暗啞，尾部變黑。體重明顯降低(P＜0.01)，血糖水平（造模后第3天和第28天）明顯升高(P＜0.01)。
　　糖尿病大鼠胃組織癱軟、變大，胃底變化尤為明顯;胃排空異常，胃內(nèi)常有內(nèi)容物殘留。
　　1.2大鼠胃體、胃竇平滑肌功能的變化
　　正常及糖尿病大鼠胃體

4、平滑肌電場刺激誘發(fā)收縮反應(yīng)、胃竇自發(fā)收縮活動均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　1.3電場刺激誘發(fā)大鼠胃底平滑肌收縮反應(yīng)及機制
　　正常大鼠胃底平滑肌標(biāo)本，電場刺激(20Hz)誘發(fā)可重現(xiàn)且穩(wěn)定的收縮反應(yīng)，且收縮反應(yīng)均能被1μmol·L-1阿托品或0.1μmol·L-1河豚毒素(TTX)完全阻斷;糖尿病大鼠胃底平滑肌收縮反應(yīng)顯著小于正常大鼠(P＜0.05)，且收縮幅度明顯紊亂，參差不齊。
　　1.4電場刺激誘發(fā)大鼠胃底

5、平滑肌及幽門環(huán)形肌舒張反應(yīng)及機制
　　電場刺激(1～10Hz)正常及糖尿病大鼠胃底平滑肌及幽門環(huán)行肌誘發(fā)頻率依賴性舒張反應(yīng)，且舒張反應(yīng)均能被0.1μmol·L-1 TTX完全阻斷。糖尿病大鼠胃底平滑肌舒張反應(yīng)顯著大于正常大鼠(P＜0.01)，幽門環(huán)行肌舒張反應(yīng)顯著小于正常大鼠(P＜0.01)。
　　以0.3μmol·L-1卡巴膽堿預(yù)收縮標(biāo)本，100μmol·L-1 L-NAME顯著抑制電場刺激誘發(fā)的正常和糖尿病大鼠胃底環(huán)行肌

6、舒張反應(yīng)，1Hz時的抑制率分別為94.8％和93.7％，且應(yīng)用L-NAME后，兩組大鼠胃底環(huán)行肌舒張反應(yīng)無顯著差異(P＞0.05)，聯(lián)合應(yīng)用α-糜蛋白酶或蘇拉明進一步抑制舒張反應(yīng)，抑制作用強于單獨使用L-NAME（P＜0.05）。
　　2小檗堿對糖尿病大鼠離體胃底、幽門環(huán)行肌功能的影響及機制
　　2.1小檗堿體內(nèi)、體外給藥對電場刺激誘發(fā)大鼠胃底環(huán)行肌收縮反應(yīng)的影響及機制
　　高劑量灌胃給藥和腹腔注射給藥均能糾正糖尿病大

7、鼠電場刺激誘發(fā)胃底環(huán)行肌收縮幅度的紊亂，并增強收縮反應(yīng)(P＜0.05);低劑量灌胃給藥無明顯作用。
　　1，10μmol·L-1小檗堿體外給藥濃度依賴性增強電場刺激誘發(fā)的正常大鼠（分別增強20.8％和47.7％，P＜0.05）和糖尿病大鼠（分別增強54.5％和130.6％，P＜0.05）胃底環(huán)行肌收縮反應(yīng)，并能糾正糖尿病大鼠胃底環(huán)行肌收縮幅度的紊亂（改善率達100％）。L-NAME單獨存在及L-NAME、α-糜蛋白酶和蘇拉明共同存

8、在下，正常及糖尿病大鼠胃底環(huán)行肌收縮反應(yīng)顯著增強，且糾正了糖尿病大鼠收縮紊亂;并且10μmol·L-1小檗堿進一步明顯增強電場刺激誘發(fā)的糖尿病大鼠胃底環(huán)行肌收縮反應(yīng)。
　　電場刺激誘發(fā)的胃底環(huán)行肌收縮反應(yīng)均能被1μmol·L-1阿托品或0.1μmol·L-1 TTX完全阻斷（P＜0.01）。
　　2.2小檗堿體內(nèi)、體外給藥對電場刺激誘發(fā)大鼠胃底環(huán)行肌舒張反應(yīng)的影響及機制
　　高劑量灌胃給藥顯著改善糖尿病大鼠離體胃底平滑

9、肌舒張反應(yīng)的過度增強(P＜0.01)，而低劑量灌胃給藥和腹腔注射給藥對糖尿病大鼠胃底環(huán)行肌舒張反應(yīng)無明顯改善作用。
　　以0.3μmol·L-1卡巴膽堿預(yù)收縮標(biāo)本，10μmol·L-1小檗堿對電場刺激誘發(fā)糖尿病大鼠胃底環(huán)形肌舒張反應(yīng)略有改善作用。以0.1μmol·L-1 P物質(zhì)預(yù)收縮標(biāo)本，1，10μmol·L-1小檗堿體外給藥對電場刺激誘發(fā)正常大鼠胃底環(huán)行肌舒張反應(yīng)無顯著影響。
　　以0.3μmol·L-1卡巴膽堿預(yù)收縮標(biāo)本

10、，100μmol·L-1 L-NAME顯著抑制電場刺激誘發(fā)糖尿病模型和高劑量灌胃給藥大鼠離體胃底環(huán)行肌舒張反應(yīng)，1Hz時的抑制百分率分別為93.7％和91.6％，應(yīng)用L-NAME后，兩組大鼠胃底環(huán)行肌舒張反應(yīng)無顯著差異(P＞0.05)，聯(lián)合應(yīng)用α-糜蛋白酶或蘇拉明，舒張反應(yīng)被進一步抑制(P＜0.05)。
　　2.3小檗堿體內(nèi)、體外給藥對電場刺激誘發(fā)大鼠幽門環(huán)行肌舒張反應(yīng)的影響
　　小檗堿高劑量灌胃給藥和腹腔注射給藥均顯著增強

11、糖尿病大鼠離體幽門環(huán)形肌舒張反應(yīng)。低劑量灌胃給藥無明顯效果。
　　1，10μmol·L-1小檗堿體外給藥顯著抑制正常和糖尿病大鼠幽門環(huán)肌舒張反應(yīng)(P＜0.01)。
　　結(jié)論
　　1.STZ造模4周的糖尿病大鼠胃平滑肌收縮、舒張反應(yīng)的變化中，胃各部位敏感性不同，提示糖尿病早期大鼠胃功能改變中，胃底和幽門可能最先發(fā)生病變。
　　神經(jīng)介導(dǎo)的糖尿病大鼠胃底收縮、舒張反應(yīng)，膽堿能、氮能神經(jīng)受損;NO和ATP調(diào)控所占比例增加