肝衰竭患者血漿抑制HepG2細胞生長和增殖的研究.pdf

1、背景和目的：越來越多的研究表明肝再生障礙是肝衰竭患者死亡的一個主要原因，但目前國內外對肝衰竭患者肝再生障礙的機制并不清楚。本研究通過體外實驗，探討肝衰竭患者血漿對HepG2細胞生長及增殖的影響，并進一步探討其對HepG2細胞內細胞周期蛋白D1（CyclinD1）、細胞周期蛋白依賴激酶4（cyclin-dependentkinase4，CDK4）表達的影響，初步了解肝衰竭患者肝再生障礙的原因及機制。方法：（1）血漿置換時收集肝衰竭患者血漿

2、、肝素抗凝；（2）應用MTT法檢測50％肝衰竭患者血漿對HepG2細胞生長和增殖作用，并與正常對照血漿及小牛血清做對照；（3）分別使用5ng/ml表皮生長因子（epidermalgrowthfactor，EGF），10ng/mlEGF，20ng/mlEGF刺激50％肝衰竭患者血漿培養(yǎng)的HepG2細胞，并觀察細胞生長及增殖情況；（4）采用Hoechst染色法觀察肝衰竭患者血漿對HepG2細胞凋亡的誘導；（5）采用Western-blott

3、ing（WB）技術檢測肝衰竭患者血漿對HepG2細胞內CyclinD1、CDK4蛋白表達的影響。結果：（1）MTT比色法結果表明，與正常對照血漿比較，肝衰竭患者血漿在體外對HepG2細胞生長及增殖有明顯的抑制作用，在作用12h后，有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且這種抑制作用呈現(xiàn)時間依賴性；（2）EGF對正常對照組HepG2細胞的生長及增殖有明顯促進作用，但僅大劑量EGF對肝衰竭組HepG2細胞生長和增殖有一過性刺激作用。與EGF刺激正常

4、對照組比較，肝衰竭組各時間點細胞生長與增殖仍受到明顯抑制。（3）形態(tài)學觀察：Hoechst凋亡染色結果表明，肝衰竭患者血漿作用于HepG2細胞后，細胞凋亡率無明顯增加（P>0.05）；（4）WB結果顯示，隨著作用時間的延長，肝衰竭患者血漿抑制HepG2細胞內CyclinD1、CDK4的表達。結論：肝衰竭患者血漿對HepG2細胞生長及增殖具有較強的抑制作用，大劑量EGF對肝衰竭患者血漿培養(yǎng)的HepG2細胞增殖雖有一過性刺激作用，但并不能逆