納秒級陡脈沖對人卵巢癌細胞體外誘導(dǎo)凋亡作用及機制研究.pdf

1、脈沖電場因其獨特的電生物學效應(yīng)，已在治療中顯示出良好的應(yīng)用前景。進一步研究發(fā)現(xiàn)納秒級脈沖電場(nanosecond pulsed electric fields，nsPEF)作用下細胞出現(xiàn)了一系列與微秒級脈沖電場誘導(dǎo)細胞膜電擊穿現(xiàn)象截然不同的反應(yīng)，即細胞內(nèi)電處理效應(yīng)。納秒級脈沖由于其等值頻率很高能穿透細胞膜(外膜)，使得包括細胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜等(內(nèi)膜)和細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等出現(xiàn)一系列的功能性改變，為誘導(dǎo)腫瘤細胞發(fā)生凋亡提供了可能。近年來

2、，納秒級脈沖電場誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡相關(guān)實驗逐漸成為國內(nèi)外電脈沖生物應(yīng)用領(lǐng)域研究焦點。但目前對納秒級脈沖電場治療腫瘤的凋亡形態(tài)學報道較少；研究對象主要為白血病和結(jié)腸癌，病種較局限；凋亡機制尚未明確。因此本實驗擬通過對納秒級陡脈沖(陡脈沖與納秒級脈沖相結(jié)合的電場)體外誘導(dǎo)人卵巢癌細胞凋亡的形態(tài)及功能學觀察及凋亡機制探討，為納秒級陡脈沖應(yīng)用于卵巢癌治療提供理論及實驗依據(jù)。 第一部分納秒級陡脈沖對人卵巢癌細胞的生長抑制和凋亡誘導(dǎo)作用。

3、 目的：探討納秒級陡脈沖對人卵巢癌細胞的生長抑制和凋亡誘導(dǎo)作用。 方法：采用人卵巢癌細胞SKOV3，用電場強度為8.5(低)，10(中)，12.5(高)kV/cm的納秒級陡脈沖分別作用于SKOV3細胞5min。應(yīng)用MTT比色法，倒置顯微鏡，熒光顯微鏡及Annexin-FITC技術(shù)等方法進行檢測和觀察。 結(jié)果：中(10 kV/cm)、高(12.5 kV/cm)場強處理組對SKOV3細胞活性具有明顯抑制作用，呈劑量依賴性

4、，在處理后2～4h內(nèi)呈時間依賴性；倒置顯微鏡和熒光顯微鏡下觀察到典型的凋亡細胞形態(tài)；流式細胞儀示，中、高場強處理組早期凋亡率分別為(22.21±2.71)％、(57.30±6.51)％，與對照組(3.044±0.44)％比較均有顯著性差異。 結(jié)論：一定場強及時間范圍內(nèi)的納秒級陡脈沖能明顯抑制SKOV3細胞增殖，亦誘導(dǎo)SKOV3細胞凋亡。 第二部分納秒級陡脈沖誘導(dǎo)人卵巢癌細胞凋亡的電鏡觀察及凋亡機制的研究。 目的：

5、觀察納秒級陡脈沖誘導(dǎo)人卵巢癌細胞SKOV3凋亡的超微結(jié)構(gòu)變化及其對細胞內(nèi)鈣離子濃度即[Ca2+]i的影響。 方法：納秒級陡脈沖場強為10kV/cm，脈寬為100ns，頻率為1Hz，作用5min。SKOV3細胞經(jīng)納秒級陡脈沖作用后4h，采用透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡檢測細胞凋亡；以Fluo-3/AM為細胞內(nèi)鈣離子的熒光指示劑，用激光掃描共聚焦顯微鏡檢測納秒級陡脈沖對SKOV3細胞[Ca2+]i的影響及[Ca2+]i變化時的Ca