金針蟲(chóng)寄生真菌的分離鑒定以及毒力測(cè)定.pdf

1、中國(guó)是世界上竹子資源最豐富的國(guó)家。早園竹以其出筍早、產(chǎn)量高、經(jīng)濟(jì)效益突出而成為浙江省竹產(chǎn)區(qū)主導(dǎo)的筍用竹種，種植面積每年以15％的速度遞增。近年來(lái)，由于耕作模式的改變，早竹林地下害蟲(chóng)——金針蟲(chóng)大面積發(fā)生，部分地區(qū)爆發(fā)成災(zāi)，竹筍產(chǎn)量和質(zhì)量逐年下降，經(jīng)濟(jì)損失日漸加重。由于市場(chǎng)對(duì)作物農(nóng)藥低毒性，低殘留性的限制，在竹筍種植方面很多化學(xué)農(nóng)藥被禁用，加之竹林林分單一，金針蟲(chóng)危害已經(jīng)越來(lái)越猖獗，從客觀(guān)上要求盡快開(kāi)發(fā)出無(wú)公害，可持久控制蟲(chóng)害的生物防治措施

2、。本文以從早園竹林中的叩甲優(yōu)勢(shì)種篩胸梳爪叩甲Melanotus cribricollis(Faldermann)僵蟲(chóng)體內(nèi)分離出來(lái)的金龜子綠僵菌小孢變種Metarhizium anisopliaevar.anisopliae’s為主要研究對(duì)象，對(duì)其生物學(xué)特性以及致病力進(jìn)行了系統(tǒng)研究，結(jié)果如下：
　　1.通過(guò)形態(tài)學(xué)以及分子生物學(xué)的手段對(duì)寄生真菌進(jìn)行了鑒定。挑取僵蟲(chóng)體內(nèi)組織進(jìn)行純化培養(yǎng)，形態(tài)學(xué)觀(guān)察表明：菌落為淡黃色菌絲上簇生有墨綠色孢子

3、柱，產(chǎn)孢區(qū)域呈現(xiàn)同心圓環(huán)狀排列，孢子呈現(xiàn)鏈狀排列；單個(gè)分生孢子無(wú)色，柱形一端稍尖，一端鈍圓，孢子大小與金龜子綠僵菌孢子相仿，因此初步判定為金龜子綠僵菌小孢變種；分子生物學(xué)上將測(cè)得的序列結(jié)合從GenBank中查尋的綠僵菌屬的部分ITS序列進(jìn)行相似性分析，判定其為金龜子綠僵菌小孢變種。綜合考慮，判定寄生真菌為金龜子綠僵菌小孢變種，命名為WP08菌株。
　　2.WP08菌株在PPDA培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量以及擴(kuò)張速度最大,14d產(chǎn)孢量達(dá)到2.1

4、×105個(gè)孢子/mm2，其次為SMAY培養(yǎng)基，14d產(chǎn)孢量為1.5×105個(gè)孢子/mm2，PDA培養(yǎng)基14d產(chǎn)孢量為為0.9×105個(gè)孢子/mm2，SDA培養(yǎng)基最差，基本不產(chǎn)孢；以PPD培養(yǎng)基為底物，在25℃條件下孢子萌發(fā)率最高，24h萌發(fā)率為96.7%，產(chǎn)孢量和擴(kuò)張速度最大，產(chǎn)孢量為9.0×108個(gè)，30℃菌落擴(kuò)張速度相仿，但產(chǎn)孢量少，為1.8×108個(gè)；菌株對(duì)紫外線(xiàn)比較敏感，不同時(shí)間的紫外線(xiàn)照射均能使孢子萌發(fā)率顯著降低，萌發(fā)率隨著照

5、射時(shí)間的增長(zhǎng)而降低，照射5min后24h和48h萌發(fā)率分別為60.2%和76.2%，照射30min后24h和48h萌發(fā)率急劇下降到為0.0%和29.5%；熱處理時(shí)間越長(zhǎng)，萌發(fā)率越低，40℃水浴處理孢子30min后12h和24h萌發(fā)率為76.2%和62.5%，當(dāng)處理時(shí)間為3h時(shí)，孢子的12h和24h萌發(fā)率分別下降到28%和37.8%；孢子在pH值為7.0時(shí)萌發(fā)率最高，12h和24h萌發(fā)率上升到73.7%和94.5%；過(guò)酸或者過(guò)堿均不利于萌

6、發(fā)，當(dāng)pH值為3時(shí)，孢子不萌發(fā)；12h和24h萌發(fā)率上升到73.7%和94.5%；當(dāng)pH值繼續(xù)上升到10.0時(shí)，12h和24h孢子萌發(fā)率下降到7.3%和23.5%，表明中性環(huán)境更有利于孢子萌發(fā)。
　　3.不同菌株的毒力測(cè)定表明,WP08菌株毒力高于中國(guó)農(nóng)科院30104菌株，LRC112菌株無(wú)效果；25℃條件下，在104-107個(gè)孢子/g干土等7個(gè)孢子濃度梯度下，隨著濃度的提高，校正死亡率隨之上升，死亡率從20%上升到100%；在1