大鼠斷肢不同保存方法對血管及骨骼肌影響的實驗研究.pdf

1、目的：組織離體后，由于缺血缺氧正常代謝受到干擾逐步產(chǎn)生一系列病理變化，細胞逐步變性，當其步入不可逆性變性階段，組織必然壞死。因此，如何保存離斷的肢體，使新陳代謝過程延緩，使變性壞死延遲到來，最大限度降低缺血所造成的組織損害、延長組織細胞的活性為臨床治療贏得時間，成為提高斷肢再植成功率的關(guān)鍵。在現(xiàn)知的種種手段中低溫干燥保存是保護組織活力常用的措施，應(yīng)用器官保存液保存離體的器官在移植外科已廣泛應(yīng)用，且保存效果良好，深低溫保存離體器官在臨床上

2、的相關(guān)科室已被采用，本實驗通過制作大鼠的離斷肢體模型，選取常規(guī)低溫干燥保存、HC-A器官保存液及深低溫液氮保存三種保存方法保存斷肢，分別于8、24、72h通過觀察血管內(nèi)皮及中膜層的病理改變和超微結(jié)構(gòu)改變、骨骼肌Na<'+>-K<'+>-ATP酶的活性變化三個側(cè)面來探討不同的保存方法對斷肢的保存效果。為臨床醫(yī)生保存斷肢提供方法上的參考及相關(guān)的理論支持。 方法：實驗選用成年Wistar大鼠共45只，雌雄不限，隨機分為三組，分別為常

3、規(guī)低溫干燥保存組、HC—A器官保存液低溫保存組、深低溫液氮保存組，每組15只大鼠。將大鼠用氯胺酮麻醉，于大腿中上1/3水平環(huán)形離斷后肢，制作斷肢模型，斷肢左右數(shù)量相等，每組共30只斷肢。將斷肢分別用以上三種方法保存。常規(guī)干燥組以無菌敷料包裹，置放入冰箱中保存，保存溫度控制在0～4℃。器官保存液組保存前用無菌注射器抽取HC-A保存液(4℃)行股動脈緩慢灌注，然后將其浸泡入4℃HC-A器官保存液中，置于密閉容器中保存于冰箱中，保存溫度亦為0

4、～4℃。深低溫液氮保存組采用二步法保存方式，即中間溫度值為-20℃保存60min后再轉(zhuǎn)移到液氮中保存，實驗時采用37℃溫水浴的方式復(fù)溫。各組分別于保存8、24、72h后取標本觀測各指標。取股血管制作病理切片觀察血管內(nèi)皮及中膜層細胞的變性、壞死情況，并進行盲法觀察者半定量記分的方法記錄觀察結(jié)果進行統(tǒng)計分析，同時制作電鏡標本觀察內(nèi)皮和中膜層細胞超微結(jié)構(gòu)改變。取股三頭肌測定肌組織Na<'+>-K<'+>-ATP酶活性。實驗中所得所有數(shù)據(jù)均采

5、用SPSS10統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果用X±s表示，檢驗方法是成組設(shè)計資料兩樣本均數(shù)比較的t檢驗，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果：各組常規(guī)病理檢查結(jié)果顯示，在8h時的改變基本一致，24h后深低溫保存組病理改變與8h時相比差異不大，而單純低溫保存組和器官保存液低溫保存組血管出現(xiàn)中度的病理改變，其中單純低溫保存組較器官保存液低溫保存組病理改變嚴重，各組保存72h后的病理改變則有較大差異，在深低溫保存組半定量記分結(jié)果顯示

6、僅為輕中度改變，單純低溫保存組和器官保存液低溫保存組則為中重度的病理改變。深低溫保存組組內(nèi)各時間段的比較差異不明顯，均為輕中度的改變。電鏡觀察各組別各時間段的細胞超微結(jié)構(gòu)改變結(jié)果基本同病理改變結(jié)果。在72h后除深低溫保存組外，其余兩組均呈現(xiàn)細胞的不可逆變性表現(xiàn)。Na<'+>-K<'+>-ATP酶活性測定結(jié)果顯示用單純低溫和器官保存液保存方式保存8h與24h相比，其骨骼肌酶活性降低，而保存72h后酶的活性更是進一步降低。其統(tǒng)計學結(jié)果具有顯