維生素B6對(duì)血小板保存期間形態(tài)和功能的影響研究.pdf

1、維生素B6或vitamin B6(pyridoxine,VitB6),是蛋白質(zhì)代謝中氨基酸脫羧酶及轉(zhuǎn)氨酶的輔助成分,也是目前應(yīng)用比較廣泛的維生素B類(lèi)藥物。臨床上主要用于維生素B6缺乏癥、人類(lèi)鐵粒幼細(xì)胞性貧血、鐮狀細(xì)胞性貧血、精神分裂癥、吡哆醇反應(yīng)性癲癇、哮喘等疾病的治療。近年來(lái),隨著人們對(duì)VitB6作用機(jī)制研究的深入,以及藥理學(xué)的研究進(jìn)展,特別是在輸血醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,最新的研究發(fā)現(xiàn)VitB6可以促進(jìn)內(nèi)源性一氧化氮和血小板源性一氧化氮的生物合成

2、。這種生化反應(yīng)對(duì)血小板體外保存具有保護(hù)作用,因?yàn)檠“逶隗w外保存過(guò)程中,隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)其血小板形態(tài)發(fā)生改變,血小板被活化,使其功能發(fā)生改變,影響臨床輸注效果,甚至導(dǎo)致血小板輸注無(wú)效(PTR)。因此在血小板保存期間,如何有效地保護(hù)血小板的功能和形態(tài),進(jìn)而提高血小板臨床輸血效果是當(dāng)前輸血領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)VitB6和血小板表面蛋白會(huì)發(fā)生特殊結(jié)合,從而防止血小板凝聚活化,起到了保護(hù)血小板功能形態(tài)的作用。本研究擬通過(guò)補(bǔ)充VitB6改善

3、保存期間血小板的形態(tài)和功能,探討VitB6保護(hù)血小板形態(tài)和功能的可能機(jī)理,為血小板有效保存,防止活化提供可參考的客觀依據(jù)。
　　 目的:向保存期間的血小板(stored platelet)保存袋內(nèi)加入不同濃度的VitB6,觀察其在有效保存期內(nèi)血小板形態(tài)和功能的變化,探討VitB6在血小板儲(chǔ)存中的最佳保存濃度和可能作用機(jī)制。
　　 方法:1.分別采集6位健康男性的血小板一個(gè)治療量,約250ml／袋,每一袋無(wú)菌分裝于五個(gè)血小

4、板專(zhuān)業(yè)保存袋中(共30袋),分為A、B、C、D、E五個(gè)組,ABCD為實(shí)驗(yàn)組,E組為對(duì)照組。向各組中每一袋血小板加入不同濃度的VitB6各5ml,其最終濃度依次為A組0.5mmol／L、B組1mmol／L、C組2mmol／L、D組4mmol／,E組為等量的生理鹽水。放于22±2℃的血小板振蕩保存箱內(nèi)保存。2.分別在血小板保存的0d、1d、3d、5d共4個(gè)時(shí)相抽取血小板10ml,每次抽取完后用熱合儀熱合管道。抽取出的血小板用于測(cè)定血小板聚集

5、率(platelet aggregation,PAgT％),可溶性P-選擇素(Soluble P-selectin,sCD62p)濃度變化,NO(nitric oxide)含量,PI3K(phosphatidylinositol3-kinase)活性,cGMP(3’-5'-cyclic guanosine monophosphate)活性,血小板的計(jì)數(shù)(platelet count,PLT)、血小板濃縮液乳酸脫氫酶(lactatedeh

6、ydrogenase,LDH)和葡萄糖(glucose,GLU)含量,血小板濃縮液的血小板平均體積(mean platelet volume,MPV)和血小板分布寬度(platelet distribution width,PDW)以及血小板顯微形態(tài)變化。
　　 結(jié)果:1.臨床各指標(biāo):血小板計(jì)數(shù)和葡萄糖含量都隨保存時(shí)間的延長(zhǎng)而降低,乳酸脫氫酶含量隨著保存時(shí)間增加而增加,但實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組變化趨勢(shì)不是很明顯,不同測(cè)量時(shí)間(同一組內(nèi))

7、的效應(yīng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),同一時(shí)間點(diǎn)不同濃度組(組間)之間的效應(yīng)差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2.血小板聚集功能:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組都隨保存期延長(zhǎng)逐漸降低,C組變化趨勢(shì)最小,E組變化趨勢(shì)最大。不同測(cè)量時(shí)間(同一實(shí)驗(yàn)組內(nèi))的效應(yīng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),對(duì)照組不同時(shí)間的效應(yīng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),同一時(shí)間點(diǎn)(1d、3d、5d三個(gè)時(shí)相)不同濃度組之間的效應(yīng)差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.sCD62p

8、、cGMP、PI3K、NO濃度變化:sCD62p濃度隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,C組變化趨勢(shì)最小,E組變化趨勢(shì)最大。cGMP、PI3K、NO隨著保存時(shí)間延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)組先升高,到3d后開(kāi)始下降,其中C組變化趨勢(shì)最大,不同時(shí)間的效應(yīng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),同一時(shí)間點(diǎn)(1d、3d、5d三個(gè)時(shí)相)不同濃度組之間的效應(yīng)差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而對(duì)照組cGMP、PI3K濃度沒(méi)有什么變化,不同時(shí)間的效應(yīng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)

9、,NO隨著保存時(shí)間延長(zhǎng)而下降,不同測(cè)量時(shí)間的效應(yīng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4.血小板形態(tài)變化:①用包埋切片法在血小板電鏡下觀察保存期間內(nèi)形態(tài)變化,選用VitB6濃度為2mmol／L為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組比較,可見(jiàn)保存1天和3天后的血小板內(nèi)部結(jié)構(gòu)基本正常,a顆粒、致密顆粒、溶酶體、開(kāi)放小管系均正常,兩組變化不大。保存5天的對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組相比,對(duì)照組血小板部分出現(xiàn)形態(tài)改變,偽足狀突起,即樹(shù)突型血小板,開(kāi)放小管增多,血小板聚集在一起,與實(shí)驗(yàn)

10、組對(duì)比有差異。②血小板分布寬度和血小板平均體積變化:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在血小板保存期內(nèi)變化不明顯,同一組別和同一時(shí)間點(diǎn)內(nèi)各組變化不明顯,無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論:1.血小板保存期間,隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng),其形態(tài)和功能發(fā)生了不利的變化,特別是隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)血小板聚集率的下降和血小板被活化,導(dǎo)致臨床上血小板輸注無(wú)效。2.VitB6在濃度為0.5mmol／L-4mmol／L時(shí)成濃度依賴(lài)性的抑制血小板聚集和活化,其中