JMJD3調(diào)控彌漫性大B細胞淋巴瘤進展的作用機制研究.pdf

1、彌漫性大B細胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)在成人群體中是非霍奇金氏淋巴瘤中最常見的一個亞類,約占所有非霍奇金氏淋巴瘤的30-40％。DLBCL是一種異質性很高的淋巴瘤,其臨床表現(xiàn)多樣,在形態(tài)學、遺傳學、免疫表型以及預后等方面都表現(xiàn)出很高的異質性。目前根據(jù)B細胞分化所處的階段將其分為兩個分子亞群:生發(fā)中心來源的彌漫性大B細胞淋巴瘤和活化B細胞來源的彌漫性大B細胞淋巴瘤。這兩種亞型的DLB

2、CL來源于處在不同分化階段的B細胞,各自具有獨特的生物學特征:在GCB亞型的DLBCL中普遍存在BCL2基因的染色體異位,而在ABC亞型的DLBCL中,腫瘤細胞中通常存在各種基因突變從而導致NF-κB信號通路的持續(xù)活化來維持腫瘤細胞的存活。
　　近年來對基因組的研究發(fā)現(xiàn),在DLBCL中普遍存在組蛋白和染色質修飾相關的表觀遺傳調(diào)節(jié)因子基因表達異常,并且影響了DLBCL的發(fā)生和進展。在這些表觀遺傳調(diào)節(jié)因子中,JMJD3是含有JmjC結

3、構域的酶家族的成員,其主要功能是通過調(diào)節(jié)H3K27的去甲基化,從而調(diào)節(jié)目的基因的表達。目前研究發(fā)現(xiàn)JMJD3在抗原驅動的B細胞的活化過程中起著重要作用,并且在霍奇金淋巴瘤中普遍存在JMJD3過表達的現(xiàn)象。但是其在DLBCL發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其內(nèi)在的分子機制現(xiàn)在尚未明確。我們的研究旨在明確JMJD3在DLBCL腫瘤發(fā)展過程中的調(diào)控作用和內(nèi)在的分子調(diào)控機制。
　　為了探索JMJD3在DLBCL發(fā)生和進展中的作用,我們檢測了DLBC

4、L腫瘤組織中JMJD3的表達情況。通過對100例DLBCL腫瘤組織的免疫組織化學染色,我們發(fā)現(xiàn)和正常淋巴結組織相比,JMJD3在DLBCL腫瘤組織中普遍存在高表達的現(xiàn)象。接下來我們進一步檢測了HMy2.CIR和七株DLBCL腫瘤細胞系中JMJD3的表達情況,同樣發(fā)現(xiàn)在大部分腫瘤細胞系中JMJD3表達水平較高。
　　接下來我們檢測了JMJD3對DLBCL腫瘤細胞生物學特征的影響,首先檢測了過表達或者沉默JMJD3對DLBCL腫瘤細胞

5、活力和凋亡的影響,結果發(fā)現(xiàn)在DLBCL腫瘤細胞中過表達JMJD3能夠增強腫瘤細胞的活力,沉默JMJD3的表達能夠誘導腫瘤細胞發(fā)生凋亡。然后進一步對JMJD3在DLBCL抗凋亡作用中的內(nèi)在分子機制進行探討。我們檢測了JMJD3對干擾素調(diào)節(jié)因子家族基因的影響,結果發(fā)現(xiàn)在兩種亞型的DLBCL中JMJD3都能夠正向調(diào)節(jié)IRF4的表達,ChIP實驗證明JMJD3能夠調(diào)節(jié)IRF4啟動子區(qū)域結合組蛋白的甲基化水平。但是接下來的研究發(fā)現(xiàn)在不同亞型的DL

6、BCL中,JMJD3通過不同的分子機制調(diào)控DLBCL腫瘤發(fā)展。
　　在ABC亞型的DLBCL中,在沉默JMJD3的基礎上過表達IRF4能夠緩解沉默JMJD3引起的腫瘤細胞的凋亡,說明IRF4介導JMJD3的抗凋亡作用。迸一步研究發(fā)現(xiàn),JMJD3-IRF4調(diào)節(jié)信號主要是通過調(diào)節(jié)下游的NF-κB信號通路的活化來維持腫瘤細胞的存活。轉錄因子IRF4可以通過調(diào)節(jié)NF-κB信號通路的活性來調(diào)節(jié)JMJD3的表達,JMJD3-IRF4-NF-κ

7、B形成一個對于維持腫瘤細胞存活起著重要作用的正反饋調(diào)節(jié)環(huán)路。
　　在GCB亞型的DLBCL中,JMJD3通過調(diào)節(jié)抗凋亡蛋白BCL2的表達來維持腫瘤細胞的存活。通過ChIP實驗證明JMJD3能夠調(diào)節(jié)BCL2啟動子區(qū)域結合組蛋白的甲基化水平,提示BCL2是另一個JMJD3的下游靶基因。在沉默JMJD3的基礎上過表達BCL2能夠緩解沉默JMJD3引起的腫瘤細胞的凋亡,說明BCL2介導GCB亞型的DLBCL中JMJD3的抗凋亡作用。在AB

8、C亞型的DLBCL中,在沉默JMJD3的基礎上過表達BCL2能夠部分緩解沉默JMJD3引起的腫瘤細胞的凋亡,提示BCL2也參與了ABC亞型的DLBCL中JMJD3的抗凋亡作用。
　　在ABC亞型和GCB亞型的DLBCL小鼠腫瘤模型中,瘤內(nèi)多點注射JMJD3siRNA都可以抑制腫瘤的生長同時誘導腫瘤細胞發(fā)生凋亡。
　　通過上述實驗,我們主要得出以下結論:在DLBCL中,JMJD3通過抗凋亡作用維持DLBCL腫瘤細胞的存活;在A

9、BC亞型的DLBCL中,JMJD3主要通過調(diào)節(jié)IRF4的表達從而進一步影響NF-κB信號通路的活性來維持腫瘤細胞的存活,JMJD3-IRF4-NF-κB形成致瘤性的正反饋調(diào)節(jié)環(huán)路;在GCB亞型的DLBCL中,JMJD3主要通過調(diào)節(jié)抗凋亡蛋白BCL2的表達來維持腫瘤細胞的存活;瘤內(nèi)多點注射JMJD3 siRNA可以抑制腫瘤的生長同時誘導腫瘤細胞發(fā)生凋亡。
　　綜上所述,由于JMJD3對于維持DLBCL腫瘤細胞的存活起著重要作用,提示