哮喘小鼠肺T細胞中LAT的表達及其功能的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:哮喘是由多種細胞和細胞成分參與的氣道慢性炎癥性疾病,也是一種具有多基因遺傳傾向的疾病。在哮喘的發(fā)病過程中,T細胞對致敏原的識別以及T細胞的活化是關鍵性始動環(huán)節(jié)。研究證實,哮喘患者體內存在Thl/Th2亞群的功能失衡:Th1型細胞免疫應答反應較正常人低,而Th2型的免疫應答水平則顯著上調。LAT基因在介導T細胞成熟分化的跨膜信號轉導中起了重要的作用。 目的:明確LAT基因在哮喘小鼠肺組織T細胞中的表達是否存在異常;構建能用于

2、LAT基因功能研究的真核表達載體;觀察氣道內LAT基因轉染對哮喘小鼠氣道炎癥的影響。 方法:免疫磁珠負選法分離純化小鼠肺臟T細胞,純度經流式細胞儀驗證。采用半定量PCR及Western Blot方法檢測哮喘小鼠與正常小鼠肺組織T細胞中LAT的表達是否存在差異;利用基因克隆技術構建真核表達載體Pcmv-HA-LAT,轉染小鼠淋巴細胞,運用Western Blot方法檢測外源LAT蛋白的表達;經鼻滴入Pcmv-HA-LAT質粒與脂質

3、體的混合物后觀察小鼠BALF中細胞成分、BALF及血清中IL-4及IFN-γ,肺組織病理改變。 結果:提取的小鼠肺組織T細胞純度>95%;哮喘小鼠肺組織T細胞的LAT基因在Mrna轉錄水平及蛋白水平的表達均顯著低于正常小鼠(P<0.05)。構建的真核表達載體Pcmv-HA-LAT成功轉染小鼠淋巴細胞,并運用Western Blot方法檢測到外源LAT蛋白的表達;轉入了LAT基因后,哮喘小鼠BALF中細胞總數(shù)、嗜酸粒細胞百分比、

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