獼猴轉(zhuǎn)基因載體病毒的篩選和新型獼猴認(rèn)知自動測試系統(tǒng)的建立.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種以老年斑和神經(jīng)纖維纏結(jié)為主要病理特征的神經(jīng)退行性腦疾病。關(guān)于AD的發(fā)病機制，兩個最有影響力的假說是淀粉樣蛋白(amyloidβ，Aβ)級聯(lián)假說和tau蛋白假說。AD多起病于老年期，AD病人認(rèn)知功能進行性丟失，以記憶損害為早期表現(xiàn)。被確診后的AD患者，剩余的存活期平均約只有5.7年，并且患者發(fā)病后一直需要有人照顧，后期生活不能自理。AD患病人數(shù)已經(jīng)超過2600萬且在逐漸增多

2、，給家庭和社會帶來重大的經(jīng)濟和精神負擔(dān)。AD至今無有效的治療方法，而基于AD小鼠模型開發(fā)的許多藥物的臨床試驗失敗。獼猴與人類親緣關(guān)系更近，并且在老年獼猴腦中發(fā)現(xiàn)存在Aβ斑塊。因此建立能反應(yīng)AD病程的有效獼猴模型，探索AD的疾病機理，并尋找有效的診斷和治療方法，既具有重大的科學(xué)意義，又是亟待解決的科學(xué)難題。
　　我們實驗室擬采用向獼猴大腦皮層注射攜帶家族性AD基因的病毒或體外合成并培養(yǎng)的纖維化Aβ42的方法，來建立AD獼猴模型。建模

3、的兩個關(guān)鍵準(zhǔn)備工作是:1）篩選合適的病毒載體，為下一步的轉(zhuǎn)基因工作做準(zhǔn)備;2）建立一套新型認(rèn)知檢測系統(tǒng)，用來對獼猴實驗處理前后的學(xué)習(xí)記憶能力進行評價。這兩部分工作構(gòu)成了本論文的主要內(nèi)容。
　　病毒篩選方面，根據(jù)國內(nèi)外文獻，我們嘗試了慢病毒和腺相關(guān)病毒(AdenoAssociated Virus，AAV)，總共有15種。在獼猴腦中只有AAV2和AAV2/9這兩種病毒有表達，而對照實驗在大鼠腦中只有攜帶Swedish/Dutch/Lo

4、ndon AD基因的慢病毒、AAV2/8、AAV2和AAV2/9，這四種病毒有表達，在此基礎(chǔ)上我們還摸索出一種合適的病毒注射方法。在獼猴認(rèn)知系統(tǒng)建立方面，我們建立了一套獼猴自由活動情況下，觸摸屏認(rèn)知自動綜合測試新型系統(tǒng)。這套系統(tǒng)在國內(nèi)屬于首創(chuàng)。該系統(tǒng)實現(xiàn)了4種測試軟件，主要用來測試獼猴空間和非空間的工作記憶能力。軟件中的視覺空間學(xué)習(xí)測試，已有三只獼猴學(xué)會了，并都做滿了1000個任務(wù)。此外，我們還開發(fā)了一套較好的獼猴訓(xùn)練方法。所有的努力為