五味子及木脂素成分對(duì)CYP3A酶活性的雙重作用.pdf

1、五味子(Schisandra chinensis(Turcz．)Baill)，是五味子科五味子屬植物，具有止痛止咳、提高肝功能、收斂滋補(bǔ)等功效。近年來研究發(fā)現(xiàn)五味子的一種木脂素成分五味子酯甲體外可抑制人肝微粒體CYP3A4的酶活性。但是，另外一些研究的結(jié)果與之相反：灌服五味子水提物可以誘導(dǎo)大鼠肝CYP450總水平增高，并加快丙咪嗪和利多卡因的代謝；五味子提取物及某些成分在人肝細(xì)胞培養(yǎng)體系中可誘導(dǎo)CYP3A4的mRNA表達(dá)。由于五味子對(duì)C

2、YP3A酶活性的抑制或誘導(dǎo)均來自獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)研究，因此其原因難以確定，存在以下幾種可能：(1)實(shí)驗(yàn)誤差；(2)五味子在不同實(shí)驗(yàn)條件下(濃度、時(shí)間、離體/整體、動(dòng)物種屬等)呈現(xiàn)不同性質(zhì)的作用；(3)五味子中不同活性成分分別產(chǎn)生酶抑制與誘導(dǎo)作用，依實(shí)驗(yàn)體系不同觀察到性質(zhì)不同的CYP3A酶活性的變化。課題計(jì)劃在不同實(shí)驗(yàn)體系和條件下系統(tǒng)考察五味子對(duì)CYP3A酶活性的影響性質(zhì)及程度，進(jìn)而闡明五味子對(duì)CYP3A酶活性的不同作用的原因并探討其可能的臨床

3、意義。我們采用大鼠肝微粒體模型和人肝微粒體及肝細(xì)胞模型，通過測(cè)定CYP3A酶的特異性底物睪酮代謝成6β羥基睪酮的速率來反映CYP3A酶活性，分別在離體和整體條件下研究五味子提取物對(duì)大鼠肝CYP3A酶和人肝CYP3A4酶活性的影響，并通過藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察CYP3A酶活性改變對(duì)其他藥物效應(yīng)的影響。此外我們還對(duì)八種五味子科木脂素組分和兩種木脂素衍生化合物對(duì)CYP3A4酶活性的影響進(jìn)行了研究以期尋找構(gòu)效關(guān)系的線索。 第一部分五味子對(duì)大鼠肝

4、微粒體CYP3A酶活性的影響 目的：研究離體條件下五味子、五味子科木脂素成分和五味子衍生藥物聯(lián)苯雙酯、雙環(huán)醇對(duì)大鼠肝CYP3A酶活性的影響；研究五味子水提物體內(nèi)給藥對(duì)大鼠肝CYP3A酶活性的影響。 方法：(1)建立大鼠肝微粒體孵育體系，處理組加入30～1500mg·mL<'-1>的五味子水提物，對(duì)照組僅加入tris緩沖液，孵育15min后再加入特異性底物睪酮孵育20min，甲醇終止反應(yīng)，用高效液相色譜儀檢測(cè)代謝產(chǎn)物6 B

5、羥基睪酮的生成速率反映CYP3A的酶活性變化。同法測(cè)定五味子醇提物、五味子科八種木脂素成分和聯(lián)苯雙酯、雙環(huán)醇對(duì)大鼠用FCYP3A活性的影響。(2)大鼠灌胃給予不同劑量的五味子水提物(1g/kg和3g/kg)，每日一次，分別于首次給藥后12h、3d和6d，取肝組織制備肝微粒體，同前述方法測(cè)定五味子水提物整體給藥時(shí)CYP3A酶活性的影響。 結(jié)果：離體給藥時(shí)，五味子水提物和醇提物對(duì)大鼠CYP3A酶活性呈濃度依賴性抑制作用，半數(shù)抑制濃度

6、IC<,50>分別為487.8和175.7 mg/L，五味子酯甲、南五味子素、異南五味子素、內(nèi)南五味子素、angeloyl binankadsurina A和雙環(huán)醇的IC<,50>分別為3.77、6.18、20.67、16.43、23.07和12.46μM。整體給藥五味子水提物對(duì)大鼠肝微粒體CYP3A酶活性的影響呈現(xiàn)抑制和誘導(dǎo)雙重作用，即給藥后12h為酶抑制，3d后由抑制轉(zhuǎn)為誘導(dǎo)趨勢(shì)，6d后呈現(xiàn)誘導(dǎo)作用。 結(jié)論：五味子水/醇提取

7、物、五味子酯甲、南五味子素、異南五味子素、內(nèi)南五味子素、angeloylbinankadsurina A和雙環(huán)醇對(duì)大鼠肝CYP3A活性有濃度依賴性抑制作用。五味子水提物整體給藥對(duì)大鼠CYP3A酶活性表現(xiàn)為抑制和誘導(dǎo)雙重作用。 第二部分五味子水提物整體給藥對(duì)氯吡格雷抗大鼠血小板聚集作用的影響 目的：通過藥效學(xué)考察五味子水提物整體給藥對(duì)CYP3A酶活性的雙重作用評(píng)價(jià)五味子引起藥物相互作用的可能性。 方法：大鼠灌胃給予

8、五味子水提物(3g/kg)，每日一次，分別予首次給藥12h和6d后單次灌胃給予氯吡格雷(2mg/kg)，兩小時(shí)后從腹主動(dòng)脈采血觀察ADP 誘導(dǎo)的血小板聚集率的變化。 結(jié)果：?jiǎn)斡寐冗粮窭讓?duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集抑制率為61.9±9.8％，灌服五味子水提物(3g/kg) 12h后氯吡格雷作用減弱，抑制率降低為40.0±14.2％，灌服五味子水提物6d后氯吡格雷作用增強(qiáng)，抑制率增高到80.9±8.3％。 結(jié)論：大鼠灌胃給予五味

9、子水提物早期(12h)可抑制CYP3A酶活性，從而抑制氯吡格雷的抗血小板活性；反復(fù)多次給藥(6d)后，五味子水提物可誘導(dǎo)CYP3A酶活性，從而增強(qiáng)氯吡格雷的抗血小板活性。 第三部分五味子對(duì)人肝細(xì)胞色素P450同功酶的影響 目的：研究五味子水提物及木脂素成分對(duì)離體人肝CYP3A4酶活性的影響，并考察五味子對(duì)CYP1A2、CYP2A6、CYP2D6酶活性的影響。 方法：(1)采用健康成人肝微粒體，處理組加入30～15

10、00mg·mL<'-1>的五味子水提物，孵育15 min后再分別加入CYP1A2、2A6、2D6和3A4相應(yīng)底物(非那西丁、香豆素、右美沙芬和睪酮)，孵育30 min。反應(yīng)終止后用HPLC測(cè)量代謝產(chǎn)物(對(duì)乙酰氨基酚、7-羥基香豆素、0-脫甲基右美沙芬和6β-羥基睪酮)的生成速率，計(jì)算CYP1A2、CYP2A6、CYP2D6和CYP3A4的活性。同法觀察八種五味子科木脂素成分(終濃度為100μM)、五味子衍生物聯(lián)苯雙酯和雙環(huán)醇對(duì)人肝微粒體

11、CYP3A4酶活性的影響。(2)采用健康人原代肝細(xì)胞培養(yǎng)體系，處理組加入1500 mg·mL<'-1>的五味子水提物，對(duì)照組僅加入培養(yǎng)液，陽性對(duì)照組加入利福平(50pM)，共同培養(yǎng)3d后加入CYP3A4底物睪酮孵育60 min，反應(yīng)終止后同上法測(cè)定酶活性。 結(jié)果：(1)五味子水提物對(duì)CYP2A6、CYP2D6、CYP1A2、CYP3A4同功酶具有濃度依賴性抑制作用(IC<,50>分別為382.8、456.7、370.0和317.

12、3mg/L)；八種五味子木脂素成分對(duì)CYP3A4活性的抑制活性有明顯差異，其中異南五味子丁素、內(nèi)南五味子素、南五味子素、五味子酯甲和angeloylbinatlkadstrin A抑制活性較強(qiáng)在100μM濃度時(shí)可使CYP3A4的酶活性降低到5％以下。聯(lián)苯雙酯和雙環(huán)醇可濃度依賴性的抑制人CYP3A4酶活性，IC<,50>分別為10.0μM和28.8μM。(2)人原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中，五味子水提物在1500mg/L濃度時(shí)可以使CYP3A4酶活性