視網(wǎng)膜色素變性合并肢端病變一家系致病基因篩查.pdf

1、【目的】
　　 應(yīng)用候選基因篩查、連鎖分析方法對(duì)一合并有肢端病變的視網(wǎng)膜色素變性家系進(jìn)行致病基因排除定位。
　　 【材料和方法】
　　 1．通過家系調(diào)查收集家系臨床資料。
　　 2．抽取家系成員外周血并提取全血基因組DNA。
　　 3．查閱文獻(xiàn)及網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫，確定已知的發(fā)病率高的視網(wǎng)膜色素變性致病基因?yàn)楹蜻x基因。
　　 4．對(duì)于候選基因USH2A，RPGR，通過選取微衛(wèi)星標(biāo)記，對(duì)已知遺傳狀態(tài)

2、的家系成員行聚丙烯酰胺凝膠電泳，銀染顯色后進(jìn)行非參數(shù)連鎖分析。
　　 5．對(duì)于候選基因RHO、PRPF3、PRPF8、PRPF31、RDS、RP10、RPGR、RP1基因的突變熱點(diǎn)區(qū)域設(shè)計(jì)引物，將先證者基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增后直接測序，通過與網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)，明確有無突變。
　　 【結(jié)果】
　　 家系臨床研究表明，YPH家系所患視網(wǎng)膜色素變性系遺傳性疾病，常染色體顯性遺傳可能性大。對(duì)于USH2A、RPGR做

3、的家系非參連鎖分析結(jié)果顯示，家系中患者與標(biāo)記位點(diǎn)無連鎖不平衡現(xiàn)象，故可排除這兩個(gè)基因致病。對(duì)先證者的RHO、PRPF3，PRPF8、PRPF31、RDS，RP10、RPGR基因編碼區(qū)或突變熱點(diǎn)區(qū)域直接測序結(jié)果顯示，未發(fā)現(xiàn)致病性突變。
　　 先證者RP1基因編碼區(qū)有一雜合性突變導(dǎo)致RP1蛋白D998Y突變，經(jīng)過生物信息學(xué)方法預(yù)測，這一突變是致病性突變。但是，對(duì)家系其他成員的篩查卻發(fā)現(xiàn)這一突變不與家系中患者共分離，故很可能不是YPH