雞Apela基因的鑒定及表達調控研究.pdf

1、Apelin是具有多種生物學功能的脂肪因子，其作為天然配體，能作用于oGPCRs APJ受體并激活下游通路進而調節(jié)脂肪代謝。近期研究發(fā)現(xiàn)，Apela同樣可以激活APJ受體，發(fā)揮著與Apelin相似的功能，被認為可能是一個新的脂肪因子。本研究通過前期高通量測序數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，產蛋高峰期母雞肝臟中的Apela基因表達量較青年母雞顯著上升，但其是否影響雞體內脂代謝并不清楚。為研究Apela基因的表達特性以及調控機理，同時揭示其與脂代謝的關系，本試驗

2、首先對雞Apela基因克隆并進行生物信息學分析，然后利用熒光定量PCR技術分析雞Apela基因的時空表達特性，最后采用雌激素及雌激素受體拮抗劑處理的母雞和雞胚原代細胞模型來探究雞Apela基因表達調控機制。結果如下:
　　1.熒光定量PCR驗證結果表明，雞Apela基因在產蛋高峰期母雞腫臟中的表達量較青年母雞顯著升高(P＜0.05)，與高通量數(shù)據(jù)結果一致。
　　2.根據(jù)NCBI雞基因組中的Apela基因預測序列，克隆出雞Ap

3、ela基因的編碼區(qū)序列。雞Apela氨基酸序列比對分析表明，其與人和鼠的同源性較高，同時與人和鼠Apelin C端的13個氨基酸序列相似度很高;SMRAT軟件分析結果顯示，雞Apela擁有LCR蛋白結構域，可能是其與受體結合的活性單元;經過對雞Apela及Apelin基囚的進化分析后發(fā)現(xiàn)，雞Apela基囚與Apelin基因來源于同一祖先，Apela基因極可能是由Apelin基因分化而來。
　　3.雞Apela基因表達特性研究表明，

4、Apela基因在10周齡和30周齡母雞肝臟、腎臟、胰腺中較高表達，在肺和腺胃中少量表達，而在心臟、脾臟、十二指腸、腹脂、卵巢、胸肌中幾乎無表達。Apela基因在后備期（1日齡、1周齡、10周齡、15周齡、20周齡）母雞肝臟中的表達量較低，而在產蛋高峰期（30周齡和35周齡）母雞肝臟中表達量顯著上調。結果表明雞Apela基因很可能參與雞肝臟脂肪合成代謝。
　　4.用不同濃度的17β-雌二醇對10周齡青年母雞和雞胚肝臟原代細胞處理后，

5、母雞血清脂類指標(TG、TC、VLDL-c)顯著升高，同時母雞及雞胚肝臟原代細胞中APOB和APOVLDLⅡ基因表達量較對照組顯著升高（P＜0.05），表明雌激素發(fā)揮生理作用，脂代謝旺盛。在雌激素處理體內體外模型中，雞Apela基因在雌激素處理后的母雞肝臟中表達量顯著升高(P＜0.05)，同樣在雌激素處理后的雞胚肝臟原代細胞中表達量也顯著升高（P＜005），表明雞Apela基因受到雌激素的調控。結果預示雞Apela參與雞肝臟脂代謝過程。

6、
　　5.使用雌激素及其受體拮抗劑MPP（ER-α的高度選擇性拮抗劑）、ICI182780和tamoxifen（ERα和ERβ受體的拮抗劑，tamoxifen有興奮GPR30的作用）處理雞胚腫臟原代細胞后發(fā)現(xiàn)，雌激素處理后Apela基因表達顯著上調(P＜005)，而分別加入MPP、ICI182，780和tamoxifen與雌激素共處理后，Apela基因表達水平較僅雌激素處理組顯著下調（P＜0.05），而與空白對照組無顯著差異(P＞