丹參注射液拮抗腹膜纖維化的大鼠模型及人腹膜間皮細(xì)胞的機理研究.pdf

1、目的：通過研究不同濃度丹參制劑對脂多糖致腹膜纖維化大鼠模型及體外培養(yǎng)人腹膜間皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)、金屬蛋白酶(MMP9)、組織金屬蛋白酶抑制劑(FIMP-1)、白介素(IL-6)等表達(dá)的影響，探討丹參注射劑對脂多糖致腹膜纖維化影響的部分作用機理。
　　 方法：動物實驗分為正常組、模型組、丹參小劑量組、丹參中劑量組、丹參大劑量組等5組。模型組按脂多糖0.6mg/kg體重分別在實驗開始的3、5、7、9天進(jìn)行腹腔注射；

2、藥物組按照丹參的不同濃度(6ml、12ml、24ml)加入每升腹透液中取20ml腹腔注射，每日1次，同時按照脂多糖0.6mg/kg體重分別在實驗開始的3、5、7、9天同步進(jìn)行腹腔注射。飼育28天行PET觀察通透性情況，取腹透液、血液理化檢查，取腹膜進(jìn)行免疫組化學(xué)檢查和掃描電鏡進(jìn)行觀察，比較各組間的差異，分析不同濃度丹參的作用。
　　 細(xì)胞培養(yǎng)：無菌手術(shù)取人大網(wǎng)膜進(jìn)行消化獲取間皮細(xì)胞，電鏡和免疫組化進(jìn)行鑒定，培養(yǎng)傳代至第三代進(jìn)行實

3、驗。觀察細(xì)胞活力，藥物刺激24小時后培養(yǎng)液上清夜檢測指標(biāo)，包括細(xì)胞培養(yǎng)上清相關(guān)蛋白及酶的濃度測定，TGF-β1，MMP9、TIMP1免疫組化檢測，逆轉(zhuǎn)錄鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)，并用透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果：丹參注射液可以改善腹膜纖維化大鼠的透析效能，但各組比較無顯著性差異(P>0.05)；各組問超濾量及鉀水平無統(tǒng)計學(xué)差異；實驗組、模型組2小時腹透液蛋白增加與正常組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.

4、05)，但實驗組和模型組以及實驗各組間沒有差異。光鏡下模型組，腹膜間皮細(xì)胞變?yōu)閳A形、柱形，間皮細(xì)胞有脫落，間皮下基質(zhì)明顯增厚，可見大量成纖維樣細(xì)胞及單核、巨噬細(xì)胞浸潤，且有纖維素樣物質(zhì)沉積；丹參低劑量組腹膜纖維結(jié)締組織增生變厚伴有炎細(xì)胞浸潤；中劑量組較低劑量組纖維增生略重并伴少量炎細(xì)胞浸潤；大劑量組纖維結(jié)締組織增生不明顯，炎細(xì)胞浸潤較少。電鏡下顯示間皮細(xì)胞脫落，微絨毛脫失，細(xì)胞器損傷，丹參中劑量組在維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，減輕細(xì)胞器損傷方面優(yōu)

5、于其他各組。
　　 免疫組織化學(xué)檢測TGF-β1、TIMP-1結(jié)果顯示：丹參中劑量組在各組中表達(dá)最弱，與正常組差異不明顯，與模型組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義；在丹參低劑量和大劑量組表達(dá)逐漸增強，與正常組和模型組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義；與正常組相比，腹膜組織TGF-B1、TIMP-1含量在模型組顯著升高，在丹參中劑量組中明顯下降，但丹參中劑量組IL-6、MMP9則表達(dá)上調(diào)，與其他各組相比有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 細(xì)胞培養(yǎng)：培養(yǎng)的腹膜間皮

6、細(xì)胞經(jīng)高糖干預(yù)后，丹參低、中、高組間皮細(xì)胞MTT還原能力與正常組比較顯著降低(P<0.05)，與模型組比升高明顯(P<0.05)；間皮細(xì)胞增殖活性丹參中劑量組顯著高于丹參低劑量組和丹參高劑量組(P<0.01)。細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中TGF-β1的含量發(fā)生明顯變化，模型組與實驗組較正常組顯著升高(P<0.05)；丹參組低、中、高組顯著低于模型組(P<0.05)，丹參組之間比較，丹參中劑量組顯著低于丹參高、低劑量組(P<0.05)。FN方面，高

7、糖和脂多糖作用后，與正常組相比，模型組與實驗組細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中FN的含量顯著性增加(P<0.05)，丹參高、中、低劑量組分別為與模型組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，丹參中劑量組較丹參高、低劑量組相比能明顯抑制MC的FN生成(P<0.05)。
　　 結(jié)論：丹參注射液可以顯著改善脂多糖致大鼠腹膜纖維化后大鼠腹膜的透析效能，有效的抑制致纖維化細(xì)胞因子TGF-β1、TIMP-1的表達(dá)，上調(diào)MMP-9水平，減輕細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，對脂