草莓重茬病菌拮抗細(xì)菌篩選鑒定及其抑菌機(jī)理初步研究.pdf

1、本研究從藥用植物材料混配的腐解物和經(jīng)上述植物材料混合處理3個(gè)月后的草莓重茬土壤中共分離純化得到40株不同形態(tài)的細(xì)菌。經(jīng)平板對(duì)峙培養(yǎng)法測(cè)定40株待測(cè)細(xì)菌的拮抗作用，結(jié)果表明：只有菌株Bs-21對(duì)立枯絲核菌、尖孢鐮刀菌和大麗輪枝菌這三種病原菌的抑菌帶寬度都達(dá)到5mm以上，且病原菌與拮抗菌之間形成抑菌帶的寬度不隨時(shí)間的推移而顯著改變。 對(duì)Bs-21進(jìn)行鑒定，其形態(tài)特征、培養(yǎng)性狀以及生理生化特征均與伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)(第八版)中描述的枯

2、草芽孢桿菌的特征相符合，因此確定其為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。 通過對(duì)Bs-21的抑菌機(jī)制研究表明，Bs-21的菌體和代謝產(chǎn)物均有一定的抑菌作用。采用對(duì)峙培養(yǎng)法測(cè)定了Bs-21的菌體對(duì)三種病原菌菌絲的抑制作用，通過顯微鏡觀察，三種病原菌的菌絲的生長(zhǎng)均受到抑制，并引起菌絲不同形態(tài)的畸形、原生質(zhì)凝結(jié)、內(nèi)含物外溢等現(xiàn)象；說明Bs-21可能產(chǎn)生多肽類和水解酶類物質(zhì)。 測(cè)定了Bs-21不同處理對(duì)尖孢鐮刀菌和

3、大麗輪枝菌的分生孢子萌發(fā)的影響，結(jié)果表明，Bs-21的發(fā)酵液濾液、高溫殺死菌體的發(fā)酵液和發(fā)酵液原液對(duì)尖孢鐮刀菌分生孢子萌發(fā)的抑制率分別為37.27﹪、45.69﹪和69.56﹪，對(duì)大麗輪枝菌的分生孢子萌發(fā)的抑制率分別為62.11﹪、61.56﹪和72.27﹪；同時(shí)Bs-21發(fā)酵液的不同處理都能不同程度地引起尖孢鐮刀菌孢子的畸形和萌發(fā)形成的芽管產(chǎn)生泡狀物；引起大麗輪枝菌的分生孢子的膨大畸形，芽管長(zhǎng)度明顯低于PD培養(yǎng)液對(duì)照；此外，Bs-21

4、的高溫滅菌液對(duì)尖孢鐮刀菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用在P=0.01水平上高于發(fā)酵液濾液，說明Bs-21的代謝產(chǎn)物可能由多種物質(zhì)組成，且受熱后活性有可能增強(qiáng)。 通過含藥介質(zhì)法測(cè)定了Bs-21代謝產(chǎn)物的抑菌活性，結(jié)果表明：Bs-21的發(fā)酵濾液和發(fā)酵高溫滅菌液的不同稀釋比例對(duì)三種病原菌菌絲的生長(zhǎng)均表現(xiàn)出了一定的抑制作用，且濃度愈高，抑制作用愈強(qiáng)。但對(duì)不同病原菌抑制作用差別明顯，對(duì)立枯絲核菌菌絲生長(zhǎng)抑制作用較弱，在稀釋比例為1:5時(shí)，Bs-2

5、1發(fā)酵濾液和發(fā)酵高溫滅菌液對(duì)其的抑制率分別為27.49﹪和17.78﹪；而對(duì)尖孢鐮刀菌和大麗輪枝菌的菌絲生長(zhǎng)抑制作用較強(qiáng)，在稀釋比例為1:5時(shí)，Bs-21發(fā)酵濾液對(duì)兩者的抑制率分別為48.53﹪和48.92﹪，Bs-21發(fā)酵高溫滅菌液對(duì)兩者的抑制率分別為37.33﹪和33.97﹪；同時(shí)，Bs-21發(fā)酵濾液對(duì)三種病原菌的抑制效果在總體水平上高于Bs-21發(fā)酵高溫滅菌液，但高溫滅菌液仍有較強(qiáng)的活性，說明Bs-21的代謝產(chǎn)物中含有具熱穩(wěn)定性的

6、物質(zhì)。 由于拮抗菌Bs-21對(duì)草莓重茬三種病原菌都具有很好的拮抗作用，具有作為生防制劑的潛力，故對(duì)其研制為生防菌劑并加以推廣應(yīng)用做出了初步的研究。本研究初步篩選了Bs-21固體發(fā)酵適宜的溫度、初始含水量和pH值條件。研究表明，三種中藥粉末(重量比1:1:1)的混合物與秸桿粉按3:20的比例混合作為固體基質(zhì)，Bs-21以10﹪的接種量接入固體基質(zhì)，34℃、80﹪含水量、初始pH值7.5時(shí)，枯草芽孢桿菌Bs-21的繁殖能力最強(qiáng)且活菌