骨髓混合培養(yǎng)過繼回輸延長小鼠移植心臟存活.pdf

1、第一部分骨髓混合培養(yǎng)細胞在體外的免疫調(diào)節(jié)作用 目的：供受者骨髓細胞（BMC）混合培養(yǎng)。探索最佳的綜合性干預方案，并初步觀察其在體外的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法：將不同濃度（1、10、100 ng/mL）的IL-7，加入由BALB/c和C57BL/6J小鼠BMC 組成的混合培養(yǎng)體系中，采用3H-TdR 法和流式細胞儀，分別在培養(yǎng)3天和5 天時檢測IL-7 對細胞增殖和凋亡的影響。IL-7（10 ng/mL）與共刺激信號阻斷劑（抗

2、-CD80和抗-CD154 單抗，均為5 μg/mL）和（或）雷帕霉素（10 ng/mL）以不同的組合，加入BMC 混合培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)3 天后檢測細胞增殖程度和CD3+ T、CD4+CD25+ T的細胞比例。 將各干預方案組中收獲的活性細胞加入混合淋巴細胞反應（MLR）體系中再培養(yǎng)4 天，檢測其對淋巴細胞增殖的影響；以C3H小鼠脾細胞作為第三方刺激細胞，檢測其免疫調(diào)節(jié)作用的抗原特異性。 結(jié)果：在培養(yǎng)體系中加入不同濃度I

3、L-7 后，細胞增殖較對照組顯著增強（p<0.05）。培養(yǎng)3 天和5 天時，各實驗組的細胞凋亡率分別為7.41±2.17％ vs 14.11±3.06％、6.76±1.86％ vs 11.00±0.74％、7.39±1.00％vs 13.05±1.7％，差異顯著（p<0.05）;與對照組（11.99±2.54％ vs22.38±0.95％）比較，差異也具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。培養(yǎng)3 天時，共刺激信號阻斷劑組中CD3+ T和CD4

4、+CD25+ T 細胞的比例，均顯著高于對照組（分別為22.39±3.67％ vs 15.57±2.43％，p<0.05；1.84±0.04％ vs 1.34±0.17％，p<0.05）。各干預方案培養(yǎng)3 天收獲的活性細胞，具有特異性抑制MLR 中淋巴細胞增殖的作用（p<0.05）。 結(jié)論：供受者BMC 經(jīng)混合培養(yǎng)獲得的活性細胞，在體外具有免疫調(diào)節(jié)作用；并能以抗原特異性的方式下調(diào)免疫應答。 第二部分骨髓混合培養(yǎng)細胞過繼回

5、輸延長小鼠移植心臟存活 目的：在小鼠腹腔異位心臟移植模型，對受者采用非清髓性的綜合性干預手段，并過繼性回輸供受者BMC 體外混合培養(yǎng)細胞，觀察其對移植物生存期的影響。 方法：以C57BL/6小鼠為供者、BALB/c小鼠為受者，行腹腔異位心臟移植術(shù)。實驗分組：I、未實施治療；II、TBI（γ射線全身照射，3 Gy，手術(shù)當日術(shù)前）+ rapamune（雷帕鳴口服液，1 mg/kg/d，d 1-d 14 連續(xù)灌胃）；III、T

6、BI + rapamune + 供受者BMC 混合培養(yǎng)細胞（1×107 個/只，經(jīng)下腔靜脈輸入）；IV、以C3H小鼠為第三方心臟供者，治療方案與第III 組相同。觀察移植心臟存活期；于移植心臟停跳當日，采用FCM 法檢測受者外周血和脾臟中CD4+CD25+ T 細胞的比例和供受者嵌合程度；采用免疫組化法檢測移植心臟局部Th1和Th2 類細胞因子的表達變化。 結(jié)果：第III 組的移植心臟存活期延長為32.8±5.9 d，與其余各組

7、比較，其差異具有顯著統(tǒng)計學意義（p<0.05）。第III 組外周血與脾臟中CD4+CD25+ T 在CD3+CD4+ T 細胞中的比例分別為50.15±15.01％和18.47±5.32％，供受者的嵌合程度分別為2.39±1.27％與9.22±2.83％，與其余各組比較，差異具有顯著統(tǒng)計學意義（p<0.05）。移植心臟局部IFN-γ的表達最低，而IL-4、IL-10的表達最高。 結(jié)論：以過繼性回輸骨髓混合培養(yǎng)細胞為主的非清髓性、