表皮生長因子影響舌苔形成的分子機制研究.pdf

1、研究目的： 舌象的變化能客觀地反映出機體的正氣盛衰、病邪深淺，是體內(nèi)病變的一面鏡子，因而舌診在中醫(yī)對疾病的診斷上起著重要作用。近年來，隨著中醫(yī)現(xiàn)代化、科學(xué)化和國際化的發(fā)展，中醫(yī)得到了越來越多的肯定，并且發(fā)揮了越來越重要的作用，然而，如何使中醫(yī)診斷和治療客觀化、科學(xué)化仍是進一步發(fā)揚光大祖國醫(yī)學(xué)的關(guān)鍵問題。 現(xiàn)代研究表明舌苔的厚薄與舌上皮細胞的增殖、分化及凋亡之間的平衡密切相關(guān)。舌黏膜上皮屬于復(fù)層扁平上皮，舌上皮細胞在增殖、

2、分化的同時，有一部分細胞發(fā)生了細胞凋亡。當(dāng)舌上皮細胞增殖與分化、凋亡處于相對平衡狀態(tài)時，舌苔表現(xiàn)為薄苔；而當(dāng)細胞增殖占優(yōu)勢，細胞凋亡和分化相對占劣勢時，舌上皮細胞增多，舌苔即變厚，反之則出現(xiàn)剝苔。 臨床觀察發(fā)現(xiàn)腫瘤患者的舌苔、舌質(zhì)變化較為明顯，提示腫瘤在患者機體生長后對人體的影響。在腫瘤患者的舌苔變化與表皮生長因子（EGF）的關(guān)系研究中，我們觀察到腫瘤患者的舌苔增厚明顯較其它疾病患者及正常人顯著，同時研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者舌苔的變化

3、與其唾液中EGF含量密切相關(guān)，舌苔增厚的腫瘤患者唾液中EGF含量明顯增高。說明EGF與舌苔變化有著密切的關(guān)系。 為了進一步分析EGF影響舌苔形成的機制，我們運用流式細胞術(shù)、Real Time-PCR、基因芯片等現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，探討了EGF對舌黏膜上皮細胞增殖、凋亡、黏附分子及EGF-R表達等的影響。由于黏附分子在組織形態(tài)發(fā)生、組織形成等方面具有重要的作用，推測其可能與舌苔變化密切相關(guān)。研究黏附分子在舌黏膜組織上的表達，可能有

4、助于進一步在分子水平上闡明舌苔形成的機制。 通過此項研究，可以：（1）分析EGF對舌黏膜上皮細胞EGF-R表達及細胞增殖的影響，進一步闡明EGF影響腫瘤病人舌苔變化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子機制；（2）分析EGF與舌黏膜上皮細胞黏附分子、細胞增殖凋亡相關(guān)基因表達的關(guān)系；（3）深入地研究表皮生長因子在舌苔形成中的作用，從基因、分子水平上探討舌苔變化的機制。（4）對不同舌苔類型的基因表達譜進行分析，篩選出差異表達基因，為進一步闡明舌苔形成的分子

5、機制研究提供依據(jù)。 研究方法： 本課題從細胞模型、臨床腫瘤患者兩個角度來探討EGF影響腫瘤患者舌苔形成的分子機制 1、EGF對舌鱗癌Tca-8113細胞增殖、基因表達影響的研究 （1）EGF對EGF-R表達以及細胞增殖影響的研究 通過流式細胞術(shù)檢測分析EGF對舌鱗癌Tca-8113細胞EGF-R表達及細胞周期的影響。 （2）EGF對凋亡增殖相關(guān)基因Fas、c-myc表達影響的研究

6、通過流式細胞術(shù)檢測分析EGF對舌鱗癌Tca-8113細胞凋亡增殖相關(guān)基因Fas、c-myc表達的影響。 （3）EGF對黏附分子表達影響的研究 通過流式細胞術(shù)檢測分析EGF對舌鱗癌Tca-8113細胞黏附分子CD29、CD54、CD106表達的影響。 2、臨床腫瘤患者不同舌苔類型基因表達差異的研究 不同舌苔的組織標(biāo)本均由江蘇省口腔醫(yī)院提供，參考《中醫(yī)診斷學(xué)》舌診標(biāo)準，選擇口腔舌鱗癌切除術(shù)患者，用無菌手術(shù)獲取

7、舌背粘膜相應(yīng)正常的區(qū)域。不同舌苔病例分為以下5組：白薄苔組、白厚苔組、黃薄苔組、黃厚苔組、無苔組。對照組胎兒正常白薄苔（取自南京某醫(yī)院婦產(chǎn)科引產(chǎn)的存活胎兒）。 （1）EGF-R在腫瘤患者常見舌苔中表達水平的研究 通過Real Time-PCR技術(shù)對不同舌苔類型舌黏膜上皮細胞EGF-R表達差異進行分析； （2）Fas在腫瘤患者常見舌苔中表達水平的研究 通過Real Time-PCR技術(shù)對不同舌苔類型舌黏膜上

8、皮細胞Fas表達差異進行分析； （3）c-myc、CD29在腫瘤患者常見舌苔中表達水平的研究 應(yīng)用HE染色觀察不同舌苔類型舌粘膜組織結(jié)構(gòu)，應(yīng)用免疫組化SP法檢測并分析舌癌病人舌粘膜上皮細胞c-myc、CD29的表達水平。 （4）常見不同舌苔的表達譜基因芯片分析研究 通過基因芯片技術(shù)檢測分析不同舌苔類型之間舌黏膜上皮細胞差異表達的基因，并進行篩選； 結(jié)論： 1、EGF通過作用于舌黏膜上皮細胞

9、的EGF-R，促進細胞增殖，同時誘導(dǎo)細胞表達更多的EGF-R，而使EGF的利用增多。 2、EGF對舌黏膜上皮細胞凋亡基因Fas及增殖分化相關(guān)基因c-myc的表達都有促進作用，并以對c-myc的促進作用更為強烈。EGF可能一方面通過使舌粘膜上皮細胞Fas蛋白表達增高，促使舌粘膜上皮細胞凋亡；另一方面，又能促使c-myc持續(xù)高表達，使舌上皮細胞過度增殖，舌粘膜上皮細胞凋亡指數(shù)降低，進而形成病理性厚苔。 3、EGF對舌黏膜上皮

10、細胞表面黏附分子的表達有著重要的影響。EGF能明顯促進舌黏膜上皮細胞CD29、CD54的表達，其中又以對CD29作用更為強烈，能使CD29持續(xù)高表達。EGF可能通過促進舌黏膜上皮細胞CD29、CD54的表達，介導(dǎo)細胞與細胞間、細胞與細胞外基質(zhì)間的粘附，從而影響舌苔形成。 4、通過基因芯片的研究，我們尋找到了部分可能在舌苔形成中或影響患者舌苔變化的相關(guān)基因，它們主要與離子通道和運輸?shù)鞍谆?、細胞周期蛋白類基因、細胞骨架和運動基因、