糖尿病大鼠勃起功能障礙氧化損傷機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)大鼠糖尿病性勃起功能障礙模型研究氧化應(yīng)激損傷與勃起功能障礙的關(guān)系及分子機(jī)制。進(jìn)一步完善鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病性大鼠ED模型及成模大鼠陰莖海綿體組織中谷胱甘肽(glutathione，GSH)、谷胱甘肽過(guò)氧化氫酶(GlutathionePeroxidase，GSH-Px)、凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bc1-2的表達(dá)檢測(cè)，觀察大鼠陰莖海綿體神經(jīng)組織、平滑肌顯微結(jié)構(gòu)及超微結(jié)構(gòu)改變。
　　方法：
　　一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2、的分組及造模：選取10周齡SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠60只，體重(247±26g)，隨機(jī)分為：正常對(duì)照組(20只)、檸檬酸一檸檬酸鈉緩沖液對(duì)照組(20只)、糖尿病組(20只)。糖尿病組大鼠采用尾靜脈注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)60mg/kg的方法建立大鼠糖尿病模型，96小時(shí)后隨機(jī)血糖大于16.7mmol/L確定為糖尿病造模成功。8周后采用頸部皮下注射阿撲嗎啡(Apomorphine，A

3、PO)100ug/kg，觀察30min內(nèi)勃起潛伏期即從給藥開始到出現(xiàn)陰莖勃起的時(shí)間、陰莖勃起次數(shù)及陰莖勃起陽(yáng)性率，檢測(cè)陰莖勃起功能。
　　二、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的采集及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。
　　1、光鏡及電鏡下觀察上述各組陰莖海綿體及血管內(nèi)皮組織形態(tài)學(xué)改變。
　　2、應(yīng)用比色法及免疫組化法定量或定性檢測(cè)各組陰莖海綿體組織中GSH、GSH-Px、Bax及Bc1-2的表達(dá)。
　　三、統(tǒng)計(jì)分析
　　各實(shí)驗(yàn)組間的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表

4、示，t檢驗(yàn)，單因素方差分析進(jìn)行多組及組間統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P值小于0.05為差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、糖尿病勃起功能障礙大鼠模型建立及誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)
　　20只注射STZ的大鼠中19只成模，成模率95％。飼養(yǎng)8周后各成模組大鼠均出現(xiàn)多飲、多食、多尿及體重減輕等糖尿病癥狀。成模大鼠因感染、酮癥酸中毒而死亡4只，病死率為21％。正常對(duì)照組及緩沖液對(duì)照組的陰莖勃起次數(shù)及勃起陽(yáng)性率與DM組相比具有顯著性差異(P<0.01)。<

5、br>　　2、GSH、GSH-Px、Bax及Bc1-2的表達(dá)。
　　注射STZ8周后，按APO誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)未出現(xiàn)勃起者作為糖尿病ED標(biāo)準(zhǔn)，糖尿病組成糖尿病性ED模型為14只，糖尿病非勃起功能障礙1只剔除出組。糖尿病ED組大鼠與正常對(duì)照組及緩沖液對(duì)照組相比，陰莖海綿體組織中GSH含量明顯降低，GSH-Px活性明顯降低。免疫組化染色顯示，Bax、Bc1-2蛋白主要表達(dá)于陰莖海綿體血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿中，多以棕色、深棕色著色為主。正常對(duì)照組及

6、緩沖液組Bc1-2細(xì)胞陽(yáng)性率高、Bax細(xì)胞陽(yáng)性率低，Bc1-2/Bax比值較高；而糖尿病ED組大鼠Bc1-2/Bax比值較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3、大鼠陰莖組織顯微及超微結(jié)構(gòu)的改變注射STZ后8周，糖尿病勃起功能障礙組大鼠陰莖組織光鏡下可見(jiàn)陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞萎縮、數(shù)目減少，成纖維細(xì)胞增多，內(nèi)皮細(xì)胞纖維化；電鏡下可見(jiàn)血竇內(nèi)皮多處斷裂，小血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，凸向管腔，使管腔狹窄，此外，內(nèi)皮細(xì)胞胞膜附件有許多小的髓

7、質(zhì)體結(jié)構(gòu)進(jìn)一步阻塞管腔。核畸形，染色質(zhì)與核基質(zhì)分離。小血管基膜增厚且不規(guī)則，血管壁飲液泡增多，內(nèi)皮細(xì)胞連接處縫隙增寬，血管外間質(zhì)有積液。
　　結(jié)論：
　　1、本研究應(yīng)用糖尿病引起的勃起功能障礙動(dòng)物模型，尋找氧化應(yīng)激標(biāo)志物。本研究應(yīng)用SD大鼠作為研究對(duì)象，通過(guò)尾靜脈注射鏈脲佐菌素的方法成功建立DM性ED模型。應(yīng)用分光光度法、免疫組織化學(xué)法和透射式電子顯微鏡等手段分別研究勃起組織的抗氧化物質(zhì)、組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。我們的

8、研究表明，大鼠陰莖組織中GSH、GSH-Px含量減少，活性降低，陰莖血管內(nèi)皮及海綿體組織處于過(guò)氧化狀態(tài)造成氧化應(yīng)激損傷。Bc1-2及Bax共同調(diào)節(jié)陰莖海綿體細(xì)胞凋亡，糖尿病ED大鼠陰莖海綿體組織中二者比例下調(diào)，細(xì)胞凋亡增加。
　　2、糖尿病性ED大鼠陰莖海綿體內(nèi)皮層明顯纖維化、血竇管腔狹窄阻塞、線粒體和內(nèi)皮功能損傷及細(xì)胞質(zhì)膜微囊增多等現(xiàn)象明顯。本研究表明，DM性勃起功能障礙中存在顯著地氧化應(yīng)激損傷。推測(cè)通過(guò)長(zhǎng)期應(yīng)用有效地抗氧化劑增