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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
眾所周知,隨著人類社會(huì)的高速發(fā)展與進(jìn)步,以動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)為病理基礎(chǔ)的心腦血管病,尤其是冠心病的數(shù)量正急速上升,成為我國(guó)人口第一位的死亡原因。AS是一多因素、多基因引起的復(fù)雜的慢性炎癥性疾病,涉及損傷的內(nèi)皮細(xì)胞與單核巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞之間的相互作用,以及局部產(chǎn)生的大量細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控,其中粘附分子、趨化因子、生長(zhǎng)因子等在AS發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。中醫(yī)學(xué)對(duì)動(dòng)脈粥
2、樣硬化的研究治療已取得一定成績(jī),中醫(yī)注重整體調(diào)節(jié)身體機(jī)能,從多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)全面干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展,在治療動(dòng)脈粥樣硬化,穩(wěn)定斑塊方面具有潛在的療效優(yōu)勢(shì)。芪參益氣滴丸是天士力集團(tuán)研制的治療心血管疾病的現(xiàn)代中藥,具有益氣活血、通絡(luò)止痛的功效,在冠心病防治中療效肯定。但芪參益氣滴丸的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用及機(jī)制尚不清楚。本研究旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法來(lái)探索其對(duì)高脂血癥及球囊損傷后大鼠血管的影響,并與他汀類調(diào)脂藥物比較對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化血
3、管保護(hù)及血漿炎癥因子的影響。
方法:
1.頸動(dòng)脈粥樣硬化模型的建立:健康雄性SD大鼠70只,常規(guī)取血后7只喂以普通飼料為對(duì)照組(Control組),63只連續(xù)飼養(yǎng)高脂飼料。16周末進(jìn)行球囊損傷實(shí)驗(yàn),恢復(fù)1周后將模型動(dòng)物分為四組,依次為球囊損傷芪參益氣滴丸組(Model+Q)、球囊損傷氟伐他汀組(Model+F)、球囊損傷模型組(Model)及球囊假損傷對(duì)照組(Sham)。球囊損傷組予以單側(cè)頸動(dòng)脈球囊損傷,球囊
4、假損傷對(duì)照組,省去球囊導(dǎo)管插入,余操作同球囊損傷模型組。
2.給藥:芪參益氣滴丸給藥劑量為200mg/kg,氟伐他汀組給藥劑量為5.5mg/kg,采用灌胃法進(jìn)行,給藥體積1ml/100g,每日1次;球囊損傷模型組、球囊假損傷組及普通對(duì)照組,采用灌胃法灌服同體積蒸餾水。
3.血清學(xué)檢測(cè):分別于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始、16周術(shù)及25周末采血作血液生化檢查。采用酶法測(cè)定TG、TC、LDL-C、HDL-C水平。于25周末采血,應(yīng)用
5、酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)TNF-α、IL-6和VCAM-1的水平。
4.組織學(xué):留取頸動(dòng)脈組織標(biāo)本,置于4%多聚甲醛溶液固定,脫水,常規(guī)石蠟包埋,間斷均勻切片,HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察各組頸動(dòng)脈組織的形態(tài)學(xué)改變。免疫組織化學(xué)染色觀察炎癥因子表達(dá)。透射電鏡觀察頸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。
結(jié)果:
1.血清學(xué)檢測(cè)
①血脂檢測(cè):基礎(chǔ)狀態(tài)實(shí)驗(yàn)大鼠血脂比較均無(wú)明顯差異(P>0.05)。16周后
6、高脂飼料大鼠TC、TG、LDL-C高于對(duì)照組(P<0.05),高脂飼料大鼠組間TG、TC、LDL-C水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。25周末,與Model、Sham組相比,Model+Q組和Model+F組TC、LDL-C水平均降低(P<0.05),其中Model+F組TC下降更為明顯(P<0.05)。與Model、Sham組相比,Model+Q組的TG水平降低(P<0.05),Model+F組TG水平無(wú)明顯降低(P>0.05
7、)。
②血清炎癥因子檢測(cè):25周末與Model組相比,Model+F和Model+Q組TNF-α、VCAM-1、IL-6水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Model+Q、Model+F兩組比較TNF-α、VCAM-1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);Model+F組IL-6水平均值較低,與Model+Q組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2.組織學(xué):①HE染色可見(jiàn)Control組大鼠頸動(dòng)脈
8、血管壁內(nèi)膜、中膜、外膜三層結(jié)構(gòu)明顯,內(nèi)膜完整、無(wú)增厚,內(nèi)皮下無(wú)脂質(zhì)沉積,中膜平滑肌細(xì)長(zhǎng)呈梭形,細(xì)胞核藍(lán)染,同心圓狀排列整齊;Model組動(dòng)脈壁內(nèi)膜明顯增厚,內(nèi)皮下可見(jiàn)泡沫細(xì)胞聚集,中膜平滑肌細(xì)胞排列紊亂,單位面積細(xì)胞核數(shù)量增多;MF、MQ內(nèi)膜增厚較模型組輕。②免疫組化Control組未見(jiàn)TNF-α、VCAM-1表達(dá)。Model組可見(jiàn)增生的內(nèi)膜內(nèi)TNF-α、VCAM-1大量表達(dá)。Model+F、Model+Q組可見(jiàn)少量表達(dá),Sham組亦可
9、見(jiàn)少量表達(dá)。③電鏡可見(jiàn)對(duì)照組超微結(jié)構(gòu)清晰,血管腔充盈,血管內(nèi)皮細(xì)胞基膜薄、光滑完整,內(nèi)皮下層結(jié)締組織清晰,內(nèi)膜層未見(jiàn)脂滴沉積,中膜平滑肌細(xì)胞呈紡錘形,密斑密體排列規(guī)則,肌絲含量豐富,線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無(wú)腫脹;模型組可見(jiàn)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化最為嚴(yán)重,主要表現(xiàn)為血管平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜遷移,核固縮,肌絲減少,線粒體明顯腫脹,呈空泡狀;芪參益氣滴丸和氟伐他汀處理組,中膜平滑肌細(xì)胞形態(tài)均有不同程度的改善,與模型組相比,線粒體腫脹減輕,密斑密體可見(jiàn),肌絲含量
10、增加,恢復(fù)收縮型細(xì)胞特征。假手術(shù)組部分細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)處于紊亂狀態(tài)。
結(jié)論:
(1)應(yīng)用內(nèi)皮機(jī)械損傷加高脂飼養(yǎng)的方法可建立與人類AS病變特征相似的動(dòng)物動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型,并具有造模時(shí)間短、適于觀察藥物療效的特點(diǎn)。
(2)本實(shí)驗(yàn)中芪參益氣滴丸和氟伐他汀均可降低TC、LDL-c水平從而抑制AS進(jìn)展。其中芪參益氣滴丸降低TC作用弱于氟伐他汀,但是同時(shí)還具有降低TG作用,二者合用可達(dá)到更好的調(diào)脂效果。
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