豌豆凝集素化載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米給藥系統(tǒng)的研制及體外糖觸發(fā)釋藥特性考察.pdf

1、多西紫杉醇(Docetaxel，DTX)為紫杉烷類新型抗腫瘤藥物，對(duì)乳腺癌、卵巢癌、肺癌、頭頸癌及胃癌等皆有較好療效。但是，該藥物的水溶性極差，生物利用度很低，現(xiàn)售制劑的不良反應(yīng)較多。為提高DTX的生物利用度及抗腫瘤活性，本論文基于凝集素的糖結(jié)合特異性，結(jié)合腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡的糖供特點(diǎn)，設(shè)計(jì)并構(gòu)建新型凝集素化載多西紫杉醇納米粒腫瘤靶向給藥系統(tǒng)。
　　以聚羥基丁酸酯(Poly[(R)-3-hydroxybutyric acid]，P

2、HB）為載體材料，以聚乙烯醇(Poly(vinyl alcohol)，PVA)為乳化穩(wěn)定劑，采用超聲乳化-溶劑揮發(fā)法制備模型藥多烯紫杉醇納米粒(DTX-PHB-NPs)，對(duì)DTX-PHB-NPs的藥劑學(xué)性質(zhì)進(jìn)行表征;綜合應(yīng)用物理吸附及微量戊二醛法對(duì)DTX-PHB-NPs進(jìn)行豌豆凝集素（Pisum sativum agglutinin，PSA）修飾，采用含葡萄糖的釋放介質(zhì)對(duì)豌豆凝集素化載藥納米粒(PSA-DTX-PHB-NPs)的糖觸發(fā)釋

3、藥機(jī)制進(jìn)行研究;篩選凍干保護(hù)劑制備PSA-DTX-PHB-NPs凍干品，提高納米粒的穩(wěn)定性。
　　本論文圍繞上述方面展開一系列研究工作，共分以下五部分。
　　第一章建立模型藥DTX的高效液相色譜（High performance liquidchromatography，HPLC）體外含量測(cè)定方法，以229 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，以乙腈-水(65∶35)為流動(dòng)相，測(cè)定DTX-PHB-NPs的含藥量及包封率，所建立的分析方法線性范圍

4、廣，專屬性好，回收率及精密度均符合方法學(xué)要求。
　　第二章在課題組前期研究基礎(chǔ)上制備DTX-PHB-NPs，對(duì)其進(jìn)行體外質(zhì)量評(píng)價(jià)。透射電鏡觀察到DTX-PHB-NPs的外觀圓整規(guī)則，粒度儀測(cè)得粒徑為(195.77±4.44) nm; HPLC法測(cè)得含藥量為(1.02±0.01) mg，包封率為（63.54±0.74）％;體外釋藥實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明:DTX-PHB-NPs的體外釋藥呈緩控、長(zhǎng)效釋藥規(guī)律。
　　第三章首先建立PSA的

5、凝膠滲透（Gel permeation chromatography, GPC）高效液相色譜含量測(cè)定方法，以280 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，以含0.5％疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液為流動(dòng)相，所建立的分析方法符合方法學(xué)要求。其次，利用植物凝集素能夠吸附在PHB顆粒表面這一特性，以直接鍵合工藝對(duì)DTX-PHB-NPs進(jìn)行PSA修飾，該方法的修飾率為(20.13±0.94)％，這一結(jié)果遠(yuǎn)低于預(yù)期目標(biāo)，限制后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。經(jīng)探索，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，在物理吸附的基礎(chǔ)

6、上，借助參與制備DTX-PHB-NPs的PVA，以微量戊二醛活化PVA表面的羥基引入醛基，利用凝集素分子中的氨基可與醛基發(fā)生親核加成反應(yīng)，將更多的PSA鍵合于DTX-PHB-NPs上，該方法綜合利用“PSA與PHB特異性物理吸附”及“微量戊二醛法”，將豌豆凝集素的修飾率提高至(50.58±0.15)％。以豌豆凝集素的修飾率為指標(biāo)，通過單因素試驗(yàn)分別考察豌豆凝集素用量、戊二醛用量、稀醋酸用量、活化時(shí)間和結(jié)合時(shí)間等主要因素對(duì)修飾率的影響，優(yōu)

7、化凝集素修飾的條件。最后，依據(jù)優(yōu)化的處方及工藝，制名PSA-DTX-PHB-NPs，并對(duì)其進(jìn)行體外性質(zhì)表征。透射電鏡觀察到凝集素化載藥納米粒外觀圓整規(guī)則，PSA附著在納米粒表面;粒度儀測(cè)得粒徑為(213.07±7.28)nm。
　　第四章首先建立牛頜下腺粘蛋白(Bovine submaxillary gland mucin，BSM)的凝膠滲透高效液相色譜(GPC-HPLC)體外含量測(cè)定方法。其次，以BSM作為PSA的特異性結(jié)合底物

8、，考察凝集素化納米粒與未凝集素化納米粒同BSM的結(jié)合能力，結(jié)果表明:鍵合納米粒之后，PSA仍保持凝集素活性。以葡萄糖作為PSA的結(jié)合底物，與未凝集素化納米粒相比較，考察葡萄糖對(duì)凝集素化納米粒與BSM結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)抑制作用，結(jié)果表明PSA具有葡萄糖特異性結(jié)合能力。最后，以含不同濃度葡萄糖的十二烷基硫酸鈉(Sodium dodecyl sulfate，SDS)溶液為釋放介質(zhì)，采用平衡透析法考察PSA-DTX-PHB-NPs的體外釋藥特性，結(jié)果表

9、明葡萄糖對(duì)PSA-DTX-PHB-NPs的體外釋藥行為具有促進(jìn)作用。
　　第五章優(yōu)選2％(w/V)甘露醇為凍干保護(hù)劑，確立合理的凍干工藝制備PSA-DTX-PHB-NPs凍干品，提高PSA-DTX-PHB-NPs的穩(wěn)定性，便于保存。納米粒凍干品的外觀、再分散性良好，粒徑、含藥量及包封率與凍干前相比無(wú)較大變化。
　　綜上所述，本論文構(gòu)建的PSA-DTX-PHB-NPs可有效包載模型藥物，體外釋藥緩控長(zhǎng)效，為后續(xù)糖介導(dǎo)的PSA-