F-box基因CG13213在果蠅眼睛發(fā)育過程功能的初步研究.pdf

1、真核生物的細(xì)胞活動通過一個復(fù)雜的交互作用調(diào)節(jié)蛋白的生成與降解從而使細(xì)胞維持在一個井然有序的狀態(tài)。而維持細(xì)胞平衡的一個重要參數(shù)就是蛋白的一個動態(tài)水平[13]。其中一重要蛋白降解機(jī)制就是泛素化蛋白降解，包括底物被泛素化和泛素化底物被26S蛋白酶降解兩個過程，而降解底物被泛素化這一過程是被降解的關(guān)鍵一步[14]。將目標(biāo)蛋白泛素化的過程:需要泛素活化酶E1、連接酶素偶聯(lián)酶E2、泛素連接酶E3。而E3具有底物特異性選擇性，從而把泛素最終連接到特點

2、底物上。E3被分為三大類:HECT、RING-finger類和U-box類。SCF復(fù)合體是RING-finger一類的E3，主要由四部分組成:Skp1，Cul1/Cdc53，Roc1/Rbx1/Hrt1，和一個F-box蛋白。F-box蛋白是SCF復(fù)合體的重要成分，它的特異性的C端結(jié)構(gòu)域被認(rèn)為是在底物的特異招募中起著作用[19]。在多種生物中已有大量F-box基因被發(fā)現(xiàn)，它們在細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)錄、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和發(fā)育等過程中發(fā)揮著重要作用[22]

3、。CG13213是果蠅的一個F-box基因，有報道在眼睛特異對CG13213進(jìn)行RNAi，發(fā)生干擾的果蠅大量死亡，少數(shù)存活的果蠅眼睛變小而且表面粗糙[47]，著意味著CG13213在果蠅眼睛發(fā)育過程中一定有著重要作用。
　　本文以果蠅為模式生物，研究CG13213在果蠅眼睛發(fā)育過程的功能，通過P因子的轉(zhuǎn)座作用敲除CG13213而獲得突變體果蠅，用MACM克隆進(jìn)行該基因功能分析。用分子克隆方法構(gòu)建CG13213過表達(dá)質(zhì)粒，通過對S2

4、細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染染色確定CG13213蛋白表達(dá)位置，通過質(zhì)粒注射而構(gòu)建的CG13213過表達(dá)果蠅用Gal4-UAS系統(tǒng)進(jìn)行過表達(dá)分析
　　通過對比發(fā)現(xiàn)CG13213與人類同源基因相識度46％，CG13213進(jìn)行的細(xì)胞定位實驗發(fā)現(xiàn)CG13213編碼蛋白fbl6位于細(xì)胞核內(nèi)，對CG13213在果蠅進(jìn)行組織特異過表達(dá)，沒發(fā)現(xiàn)有明顯表型變化，而且解剖染色發(fā)現(xiàn)在果蠅眼睛成蟲盤CG13213過表達(dá)背部區(qū)域Arm、Sens無變化。MARCM克隆分析