瑞舒伐他汀通過ERK通路抑制THP-1單核細(xì)胞MMP-9的表達(dá).pdf

1、背景及目的:急性冠脈綜合癥(acute coronary syndrome,ACS)是現(xiàn)今多發(fā)的心血管危急重癥之一,維持斑塊的穩(wěn)定性及避免泡沫細(xì)胞的形成一直是臨床實(shí)踐的首要任務(wù),研究顯示,應(yīng)用他汀類藥物可降低炎癥反應(yīng),改善內(nèi)皮功能,穩(wěn)定斑塊,抑制血栓形成等,可顯著降低心血管事件的發(fā)生。MERCURY系列研究表明,瑞舒伐他汀可降低LDL-C濃度達(dá)65％,同時(shí)升高HDL-C濃度達(dá)14%,具有治療高脂血癥的雙重功效,對比研究顯示瑞舒伐他汀較阿

2、托伐他汀、辛伐他汀和普伐他汀具有更強(qiáng)的降脂療效和達(dá)標(biāo)率,是目前他汀類藥物中療效最好的,被稱為“超級他汀”。但到目前為止,關(guān)于瑞舒伐他汀如何通過非調(diào)脂途徑,尤其是通過何種通路作用于一系列炎癥因子的研究報(bào)道不多,本實(shí)驗(yàn)旨在模擬急性冠脈綜合征患者體內(nèi)環(huán)境,通過ox-LDL(氧化型低密度脂蛋白)刺激THP-1單核源性巨噬細(xì)胞使之轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞,繼之以不同濃度瑞舒伐他汀及ERK通路抑制劑PD98059加以干預(yù),檢測細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-

3、9)的mRNA及蛋白表達(dá)情況,進(jìn)一步驗(yàn)證MMP-9與急性冠脈綜合癥的關(guān)系,探討瑞舒伐他汀作用于急性冠脈綜合癥的非調(diào)脂機(jī)制,并對其作用通路做一初步探討。
　　方法:佛波醇酯(PMA)誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞使其轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞,用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)法,分別測定單核巨噬細(xì)胞上清液中0h,6h,12h,24h,48h后MMP-9分泌情況,尋找最強(qiáng)分泌時(shí)間點(diǎn);將其分為(1)對照組:(即PMA組)(2)泡沫細(xì)胞組:PMA同濃度與 ox-

4、LDL共同刺激6小時(shí)(3)PMA+ox-LDL組+瑞舒伐他汀低濃度組(0.01umol/L),中濃度組(0.1umol/L),高濃度組(1umol/L);(4)PMA+ox-LDL組+PD98059組共同刺激6小時(shí);⑸PMA+ox-LDL組+PD98059+瑞舒伐他汀低,中,高濃度組。RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng))檢測瑞舒伐他汀不同濃度干預(yù)后,各組細(xì)胞中MMP-9mRNA表達(dá)變化;Western blot(蛋白免疫印記)測定各組細(xì)

5、胞內(nèi)MMP-9蛋白表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果:PMA誘導(dǎo)單核THP-1細(xì)胞48小時(shí)后成功轉(zhuǎn)化成巨噬細(xì)胞,單核巨噬細(xì)胞分泌MMP-9最高峰時(shí)間為12小時(shí)(P<0.01),THP-1單核源性巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞過程中MMP-9mRNA,蛋白表達(dá)均增加(P<0.01),瑞舒伐他汀不同濃度干預(yù)后MMP-9蛋白含量隨著干預(yù)濃度增加而逐漸降低,濃度越高,降低越明顯(P<0.05);若同時(shí)加入ox-LDL與ERK通路抑制劑PD98059后,MM