基于納米微粒及HPA的免疫檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、抗原檢測(cè)在微生物感染和重大疾病的診斷、疾病進(jìn)展的監(jiān)測(cè)、藥物療效觀察和耐藥性監(jiān)測(cè)以及食品衛(wèi)生等領(lǐng)域中至關(guān)重要。熒光標(biāo)記、酶標(biāo)記和放射性同位素標(biāo)記這三大抗體標(biāo)記技術(shù)是目前免疫化學(xué)、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)中應(yīng)用最廣的常規(guī)抗原檢測(cè)手段。但在微量抗原檢測(cè)上,熒光標(biāo)記及酶標(biāo)記技術(shù)還缺乏足夠的靈敏性。放射性同位素標(biāo)記技術(shù)在實(shí)際操作中由于需要特殊的設(shè)備和安全防護(hù),因此限制了它在實(shí)際過(guò)程中的廣泛應(yīng)用。
　　 本課題研究一種免疫檢測(cè)方法,用納米金珠探

2、針檢測(cè)抗原,將免疫信號(hào)轉(zhuǎn)化成核酸信號(hào),然后通過(guò)吖啶酯雜交保護(hù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DNA的量從而獲知抗原的水平。本課題完成了以下研究?jī)?nèi)容:
　　 1.制備了納米金磁探針。納米金磁微粒具有超順磁性和金表面生物分子固定化的性能,操作簡(jiǎn)單,而且,可以很好地解決生物大分子在微流控芯片微通道中的操縱。每個(gè)納米金磁可包被抗體2-3個(gè)。根據(jù)ELISA的檢測(cè)結(jié)果,包被到納米金磁上的抗體保留了免疫活性,為后續(xù)的抗原檢測(cè)做好了準(zhǔn)備。
　　 2.制備了納米

3、金珠探針。利用納米金珠標(biāo)記抗體和報(bào)告DNA,可以將免疫信號(hào)轉(zhuǎn)換為核酸分子信號(hào),對(duì)提高檢測(cè)的靈敏度起到了十分重要的作用。納米金珠包被抗體的蛋白用量為3μg/ml,即每個(gè)納米金珠表面包被抗體1-2個(gè)。免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)證明,經(jīng)抗體和DNA修飾后的納米金珠,其表面抗體沒(méi)有失去活性。
　　 3.應(yīng)用吖啶酯雜交保護(hù)實(shí)驗(yàn)(HPA)檢測(cè)報(bào)告DNA。應(yīng)用化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物吖啶酯(AE)標(biāo)記寡核苷酸探針與基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物靶序列雜交,并通過(guò)堿性水解試劑消除未雜交

4、探針的化學(xué)發(fā)光能力來(lái)達(dá)到分離的效果,通過(guò)堿性水解的方法,6分鐘可以將背景信號(hào)降低3個(gè)數(shù)量級(jí),無(wú)需轉(zhuǎn)移分離,簡(jiǎn)化了操作步驟,可以檢測(cè)達(dá)到amol級(jí)寡核苷酸?；诩{米顆粒和吖啶酯雜交保護(hù)實(shí)驗(yàn)的抗原檢測(cè)方法,可以檢測(cè)到320pg/ml羊抗鼠IgG-HRP抗原。
　　 本課題所研究的基于納米微粒系統(tǒng)及吖啶酯雜交保護(hù)實(shí)驗(yàn)的抗原檢測(cè)方法,具有操作簡(jiǎn)單,便于自動(dòng)化等優(yōu)勢(shì),同時(shí)該方法也可用于其他疾病的免疫檢測(cè)。本課題制備的納米金磁探針和納米金珠