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文檔簡介
1、目的:通過研究清熱化瘀Ⅱ號方對大鼠腦缺血再灌注損傷MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響,探討其減輕缺血再灌注損傷的作用機(jī)制,為臨床應(yīng)用清熱化瘀Ⅱ號方治療急性缺血性中風(fēng)提供理論和實驗依據(jù)。
方法:成年健康Sprague-Dawley(SD)大鼠110只,雌雄各半,隨機(jī)分為空白組(5只)、假手術(shù)組(5只)、模型組(50只)、治療組(50只),模型組、治療組按缺血2h后再灌注3h、6h、12h、24h、48h分為5個亞組,每個時間點10
2、只大鼠。采用灌胃法(ig),每天二次,上午8~9點,下午3~4點各1次。連續(xù)預(yù)處理給藥三天,最后一次于術(shù)前1h給予,術(shù)后繼續(xù)灌胃用藥,直至全部處死動物。治療組灌胃清熱化瘀Ⅱ號方,劑量為1.6ml/100g;空白組、假手術(shù)組和模型組分別灌胃與治療組等量生理鹽水;參照Longa等線栓法,并加以改進(jìn),制作急性大腦中動脈缺血再灌注損傷模型。保持大鼠局灶性腦缺血2h后進(jìn)行再灌注,分別再灌注3h、6h、12h、24h、48h進(jìn)行觀察,采用Longa
3、評分標(biāo)準(zhǔn),合格者進(jìn)入下一步操作,注意隨時補(bǔ)充因不合格或死亡淘汰的大鼠,確保每組10只。測定各組實驗大鼠腦組織含水量,觀察其病理學(xué)形態(tài)變化及運(yùn)用免疫組化的方法檢測MMP-2、MMP-9的陽性表達(dá)水平。
結(jié)果:1.各組腦組織含水量比較:模型組與假手術(shù)組比較,在各時間點腦組織含水量均明顯升高(P<0.05);治療組與模型組比較,在各時間點腦組織含水量均明顯降低(P<0.05),但高于假手術(shù)組(P<0.05);空白組和假手術(shù)組相比,腦
4、組織含水量未見明顯增加(P>0.05)。
2.運(yùn)用HE染色各組大鼠腦組織切片進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察:假手術(shù)組和空白組細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常;模型組大腦皮質(zhì)層和海馬區(qū)結(jié)構(gòu)完整性破壞,神經(jīng)細(xì)胞間隙增寬,神經(jīng)細(xì)胞不清甚至缺失,胞漿變紅,核仁破壞、甚至核固縮或消失。治療組大鼠皮質(zhì)及海馬區(qū)也可見神經(jīng)元變性,核仁破壞,也有核固縮或消失現(xiàn)象,但神經(jīng)元變性的數(shù)量明顯少于模型組。
3.免疫組化法處理腦組織切片觀察MMP-2、MMP-9的陽性細(xì)胞
5、數(shù):
(1)假手術(shù)組可見少量MMP-2、MMP-9陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá),模型組和治療組在各時間點均可見明顯增多的MMP-9和MMP-2的陽性細(xì)胞表達(dá);
(2)MMP-9陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)在缺血再灌注3h、6h有少量表達(dá),再灌注12h開始顯著增加,再灌注24h、48h繼續(xù)明顯增加;治療組與模型組比較,在各時間點MMP-9陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)均減少(P<0.05),但高于假手術(shù)組(P<0.05);
(3)MMP-2陽性表達(dá)細(xì)胞
6、數(shù)在缺血再灌注3h、6h、12h有少量表達(dá),再灌注24h開始明顯增加,再灌注48h繼續(xù)顯著增加;治療組與模型組比較,在各時間點MMP-2陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)均減少(P<0.05),但高于假手術(shù)組(P<0.05)。
結(jié)論:
1.清熱化瘀Ⅱ號方能降低腦組織含水量,改善缺血區(qū)的病理組織學(xué)變化,具有減輕腦水腫的作用;
2.清熱化瘀Ⅱ號方能明顯降低MMP-2、MMP-9的表達(dá),具有抗腦缺血再灌注損傷的作用,其機(jī)理可能是清熱
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