肝癌發(fā)生中SOX家族基因表達(dá)異常研究.pdf

1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,我國(guó)肝癌的死亡率居第二位,嚴(yán)重威脅著我國(guó)居民的健康。HCC的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段累積的復(fù)雜過(guò)程,比如病毒的感染,基因的異常表達(dá),過(guò)量攝入酒精等,但具體的分子作用機(jī)制研究尚未明確。SOX家族基因作為Wnt／β-catenin信號(hào)通路負(fù)性調(diào)控因子,其異常表達(dá)導(dǎo)致Wnt／β-catenin信號(hào)通路被異常激活與許多人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān),

2、包括膠質(zhì)瘤、結(jié)腸癌、肝癌等。
　　 目的：
　　 構(gòu)建HCC中SOX基因mRNA表達(dá)譜,分析其相關(guān)性及其與臨床病理相關(guān)因素的關(guān)系,研究SOX基因異常表達(dá)及臨床病理因素在HCC發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的作用。
　　 材料與方法：
　　 1.肝癌細(xì)胞系及組織樣本
　　 7株肝癌細(xì)胞系包括Huh-7、PU-PRL-5、Sun-449、SMMC-7721、HepG2、HBx-F344、SK-Hep1。
　　

3、 采集40例HCC患者手術(shù)后癌組織及其配對(duì)癌旁組織,7例正常肝組織,并收集其臨床病理相關(guān)資料。采集標(biāo)本和收集資料前征得患者的知情同意。
　　 2.肝癌細(xì)胞系及組織中SOX基因mRNA表達(dá)水平的測(cè)定
　　 應(yīng)用熒光定量PCR方法測(cè)定肝癌細(xì)胞系、正常肝組織、HCC癌組織及配對(duì)癌旁組織中SOX基因mRNA表達(dá)水平,以HMBS作為內(nèi)參基因。
　　 3.數(shù)據(jù)分析
　　 應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,對(duì)

4、肝癌細(xì)胞系和正常肝組織中SOX基因mRNA表達(dá)量進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn),對(duì)HCC癌組織和配對(duì)癌旁組織SOX基因mRNA表達(dá)量進(jìn)行Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn),以此描述肝癌細(xì)胞系和組織中SOX基因mRNA表達(dá)的差異。對(duì)HCC癌組織和配對(duì)癌旁組織中SOX基因mRNA表達(dá)量進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析,以此描述SOX基因之間mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性。對(duì)HCC癌組織中SOX基因mRNA表達(dá)水平與臨床病理進(jìn)行Fisher確切概率法檢驗(yàn),以此描述SOX基

5、因mRNA表達(dá)水平與臨床病理關(guān)聯(lián)性。以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.SOX基因在肝癌細(xì)胞系中的mRNA表達(dá)水平
　　 SOX2,SOX5,SOX6,SOX7和SOX17在7例肝癌細(xì)胞系中mRNA表達(dá)量均低于其在7例正常肝組織中mRNA平均表達(dá)量,且其在7例肝癌細(xì)胞系和7例正常肝組織中的mRNA表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.753,P=0.033；t=3.150,P=0.035；t=3.16

6、0,P=0.020；t=2.826,P=0.030；t=2.827,P=0.030)。
　　 2.SOX基因在HCC癌組織及配對(duì)癌旁組織中的mRNA表達(dá)水平
　　 在40例HCC癌組織中,SOX5的低表達(dá)率為40％,SOX2和SOX7的低表達(dá)率達(dá)47.5％,而SOX6的低表達(dá)率高達(dá)55％,且其在40例HCC癌組織和配對(duì)癌旁組織中的mRNA表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=-2.755,P=0.006；z=-1.978,P=-0

7、.048；z=-1.978,P=0.048；z=-2.298,P=0.022):而SOX4 mRNA在18(45％)例中的表達(dá)上調(diào),且與40例配對(duì)癌旁組織中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=-2.097,P=0.036)。
　　 3.SOX基因的相互作用關(guān)系
　　 SOX9與SOX4、SOX13與SOX5、SOX7與SOX17在HCC發(fā)生前后都存在顯著相關(guān)性。而SOX17與SOX4／SOX13、SOX7與SOX4／SOX6／

8、SOX9／SOX13、SOX2與SOX4、SOX6與同亞族基因SOX5／SOX13間的相關(guān)性隨HCC發(fā)生及進(jìn)展消失。
　　 4.SOX基因mRNA表達(dá)水平與臨床及病理相關(guān)因素的相關(guān)關(guān)系
　　 不同臨床分期的患者中SOX2、SOX7和SOX9的mRNA表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=7.087,P=0.028；x2=8.319,P=0.013；x2=5.868,P=0.046);不同肝硬化程度的患者中SOX2和SOX9 mR

9、NA表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=9.035,P=0.009；x2=7.203,P=0.021)。有無(wú)門靜脈癌栓的患者中SOX5的mRNA表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=7.968,P=0.017)；肝內(nèi)有播散和肝內(nèi)無(wú)播散的患者中SOX9的mRNA表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=7.286,P=0.025)。
　　 結(jié)論：
　　 1.HCC中SOX家族基因mRNA表達(dá)異常,它們可能通過(guò)異常激活Wnt／β-catenin信號(hào)通