瓜枝孢弱致病菌株誘導黃瓜抗病性分子機制的初步研究.pdf

1、生物因子誘導的植物抗病性是增強寄主抗病性的重要方法.與病毒相比,真菌、細菌弱致病菌及其誘導抗病機制的研究相對滯后.本論文以本實驗室通過高溫誘導在國內(nèi)外首次篩選出的瓜枝孢(Cladosporium cucumernium)弱致病菌株為試材,采用.AFLP技術(shù)系統(tǒng)分析了瓜枝孢弱致病菌株基因組的變化,以及瓜枝孢弱致病菌株誘導黃瓜抗病的差異表達,取得如下階段性進展:1、通過瓜枝孢弱致病菌株誘導黃瓜抗病性的表型鑒定,進一步驗證了瓜枝孢弱致病菌株具

2、有穩(wěn)定的致弱性,能顯著提高黃瓜對黑星病的抗性,誘導抗病效果達77.01﹪.2、瓜枝孢弱致病菌株2R和3R的孢子比對應強致病菌株2Q和3Q的孢子小,形態(tài)規(guī)則,孢子形狀呈橢圓形或近圓形,而對應強致病菌株孢子形狀多種多樣,有梭形、近梭形、橢圓形及近圓形等形狀.3、AFLP技術(shù)可以有效揭示弱致病菌株:DNA水平的變異,瓜枝孢經(jīng)50℃高溫處理得到的弱致病菌株基因組發(fā)生了顯著的變化.256個AFLP引物組合在擴增2R/2Q和3R/3Q時(2Q和3Q

3、為強致病菌株),分別產(chǎn)生2910和2216個DNA片段產(chǎn)生,2R與2Q以及3R與3Q的遺傳相似性分別為24.81﹪和43.68﹪.4、篩選并優(yōu)化了黃瓜cDNA-AFLP的PCR反應體系及反應程序.利用 cDNA-AFLP技術(shù)分析了瓜枝孢弱致病菌株誘導黃瓜抗病相關(guān)基因表達片段的時序特性:差異表達片段在弱致病菌株誘導后的9個時間點均有分布,弱致病菌株引發(fā)的一系列調(diào)控始于3h或更早,6h時呈現(xiàn)一個高峰,9h至24h期間變化不明顯,24h開始顯

4、著減少.5、獲得了經(jīng)Northern驗證的瓜枝孢弱致病菌株誘導的4個特異DNA片段序列.BLAST分析結(jié)果顯示,4個特異DNA片段與Genbank中一些編碼誘導抗病相關(guān)基因的DNA序列有較高的同源性,主要包括梨ATP合酶γ基、黑麥抗病基因R1-5、擬南芥水楊酸葡糖基轉(zhuǎn)移酶、磷脂酶C等. 上述研究結(jié)果,在理論上將為進一步深入研究瓜枝孢弱致病菌株的遺傳特性,以及進一步克隆瓜枝孢弱致病菌株誘導抗病的相關(guān)基因奠定基礎;在實踐上將為植物真