不同冷凍程序和冷凍保護劑對延邊奶山羊耳部成纖維細胞冷凍效果的影響.pdf

1、動物體細胞核移植技術是哺乳動物胚胎工程的主要組成部分，是實現(xiàn)動物克隆的有效方法[1][2]。在畜牧產(chǎn)業(yè)和轉基因動物的生產(chǎn)中有著極其廣闊的應用前景。然而動物體細胞的體外培養(yǎng)是動物克隆中非常重要的一環(huán)，但是由于哺乳動物體細胞從動物體分離后，在體外的生存期正常不會超過一年,而且還可能因為頻繁傳代導致遺傳物質的變異,因此在常規(guī)體外培養(yǎng)條件下的細胞很難無限期保持原質量。如果采取適當?shù)姆椒?，將體外培養(yǎng)的細胞在超低溫條件下保存,即可使細胞的生命力固定

2、在某一階段而不衰老死亡,對動物克隆研究具有非常重要的價值。
　　本實驗以延邊奶山羊耳部成纖維細胞為研究對象，采用組織塊加酶消化培養(yǎng)法進行原代培養(yǎng)，細胞成功擴增培養(yǎng)到5-6代后，用于冷凍保存實驗。實驗的目的是通過確定延邊奶山羊耳部成纖維細胞的最佳冷凍保存程序以及冷凍保護劑，來建立一套適合延邊奶山羊的冷凍體系，從而對這一優(yōu)良地方奶山羊品種進行必要的保存，為以后應用體細胞核移植方法重新擴繁該品系提供重要材料。實驗設計和結果如下：

3、　　1、選擇4種不同的冷凍保護程序（①4℃放30分鐘、-20℃2小時、液氮口10分鐘后投入液氮②4℃放30分鐘、液氮口2小時后投入液氮③液氮口放20分鐘后投入液氮④直接投入液氮），結果表明方法2和方法3差異不顯著，方法2解凍后細胞復蘇效果最好，細胞活率及培養(yǎng)24小時后細胞貼壁率均優(yōu)于其他方法。
　　2、選取5％、7.5%、10%和12.5%四個濃度的DMSO（二甲基亞砜）對延邊奶山羊耳部成纖維細胞進行冷凍保存，結果顯示7.5%組冷

4、凍復蘇后細胞存活率達到67.3%，培養(yǎng)24小時后貼壁率可達到65.9%，結果均高于其他各組。
　　3、選取5%、10%、15%和20%四個濃度的GC（甘油）對延邊奶山羊耳部成纖維細胞進行冷凍保存，結果顯示15%組冷凍復蘇后細胞存活率達到63.8%，培養(yǎng)24小時后貼壁率可達到63.3%，結果均高于其他各組。
　　4、選取5%、10%、15%和20%四個濃度的EG（乙二醇），對延邊奶山羊耳部成纖維細胞進行冷凍保存。結果表明，15