食蟹猴側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ1-42建立老年性癡呆動(dòng)物模型.pdf

1、目的 建立一種新的Aβ誘導(dǎo)的非人靈長(zhǎng)類老年性癡呆(Alzheimer'sDisease,AD)動(dòng)物模型，使其更接近人類AD的病理特點(diǎn)和行為特征，更貼近AD復(fù)雜的病因和病理變化過(guò)程，為研究AD的發(fā)病機(jī)制和藥物開發(fā)等提供理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?方法 成年雌性食蟹猴三只，參考《廣西獼猴腦立體定位圖譜》定位，采用微滲透泵經(jīng)側(cè)腦室或腦實(shí)質(zhì)灌注Aβ1-42聯(lián)合海馬一次性微量注射Aβ1-42及其水解酶抑制劑的方法造模。分別于手術(shù)后1

2、周、2周、5周和8周進(jìn)行延遲反應(yīng)試驗(yàn)，觀察造模前后的行為學(xué)變化。手術(shù)后8周剖殺，4％多聚甲醛灌注固定，取腦組織進(jìn)行HE、尼氏(nissle)和Bielschowsky法神經(jīng)原纖維染色，觀察腦組織基本病理改變。免疫組織化學(xué)法觀察海馬Aβ1-42、GFAP、Synaptophysin和CHAT的表達(dá)活性。 結(jié)果： 1.行為學(xué)改變 延遲反應(yīng)試驗(yàn)顯示：采用側(cè)腦室微滲透泵灌注的3號(hào)猴術(shù)后第1、第2、第5、第8周30次/天測(cè)

3、試反應(yīng)正確率呈依次下降趨勢(shì)，其中第5周和第8周下降最為明顯，與第0周比較，其差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組1號(hào)猴和對(duì)照組2號(hào)猴手術(shù)前后行為學(xué)測(cè)試無(wú)明顯變化。 2.腦組織病理學(xué)改變 2.1微滲透泵腦實(shí)質(zhì)灌注聯(lián)合海馬局部注射(1號(hào)猴)：雙側(cè)海馬可見神經(jīng)細(xì)胞固縮及小膠質(zhì)細(xì)胞侵入壞變神經(jīng)元胞體形成的嗜神經(jīng)細(xì)胞像；齒狀回可見液化性壞死；泵植入位點(diǎn)周圍腦實(shí)質(zhì)可見膠質(zhì)細(xì)胞增生及嗜神經(jīng)細(xì)胞像。 2.2微滲透泵側(cè)腦室灌注

4、聯(lián)合海馬局部注射(3號(hào)猴)：雙側(cè)海馬可見神經(jīng)細(xì)胞固縮、嗜神經(jīng)細(xì)胞像；齒狀回可見液化性壞死及小膠質(zhì)細(xì)胞增生；左側(cè)海馬及內(nèi)嗅區(qū)可見神經(jīng)元脫失；雙側(cè)丘腦和豆?fàn)詈丝梢娛壬窠?jīng)細(xì)胞像。銀染可見海馬錐體細(xì)胞排列紊亂，頂樹突神經(jīng)原纖維扭曲，但未見老年斑和神經(jīng)原纖維纏結(jié)。 2.3對(duì)照組(2號(hào)猴)：雙側(cè)海馬錐體細(xì)胞層未見明顯病變區(qū)域，神經(jīng)細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)清楚；齒狀回未見變性壞死區(qū)及小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)；內(nèi)嗅區(qū)未見神經(jīng)元丟失。 3.免疫組織化學(xué)檢

5、測(cè)： 3.1免疫組化觀察結(jié)果表明，1號(hào)猴Aβ1-42沉積散在分布于微滲透泵植入位點(diǎn)周圍小范圍區(qū)域；3號(hào)猴雙側(cè)腦室脈絡(luò)從上皮細(xì)胞、室管膜上皮細(xì)胞、雙側(cè)海馬、雙側(cè)基底前腦及鄰近側(cè)腦室的顳葉皮質(zhì)神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)均出現(xiàn)了彌散或小粒狀的棕褐色沉積；對(duì)照組未見Aβ1-42表達(dá)陽(yáng)性神經(jīng)元。 3.2實(shí)驗(yàn)組1號(hào)猴和3號(hào)猴海馬注射位點(diǎn)周圍及齒狀回的多形細(xì)胞層可見星形膠質(zhì)細(xì)胞增生。 3.3實(shí)驗(yàn)組1號(hào)猴右側(cè)海馬注射位點(diǎn)處存在明顯的突觸丟失淡

6、染區(qū)，突觸丟失部位錐體細(xì)胞消失，由增生的膠質(zhì)細(xì)胞取代。 3.4實(shí)驗(yàn)組3號(hào)猴ChAT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目減少，且著色較淺。 結(jié)論 1.本實(shí)驗(yàn)采用微滲透泵經(jīng)側(cè)腦室持續(xù)灌注Aβ1-42的方法，初步構(gòu)建了食蟹猴AD模型。 2.本模型出現(xiàn)了學(xué)習(xí)、記憶能力減低，腦內(nèi)廣泛的Aβ沉積及神經(jīng)元丟失和膠質(zhì)增生等AD樣病理改變。 3.初步證明采用微滲透泵經(jīng)側(cè)腦室持續(xù)灌注的方法構(gòu)建靈長(zhǎng)類AD模型優(yōu)于一次性微量注射的方法，