陜西山豆根提取物體外對(duì)人食管癌Eca-109細(xì)胞抗增殖及誘導(dǎo)凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的健康和生命，人們努力嘗試各種治療方法。臨床應(yīng)用證明，中草藥具有較好的抗腫瘤作用，不僅對(duì)化、放療起減毒、增敏、增效的效應(yīng)，而且能夠預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，在惡性腫瘤治療中顯示出其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。關(guān)于中草藥的有效成分及作用機(jī)理的研究越來(lái)越受關(guān)注，如長(zhǎng)春新堿(VCR)、紫杉醇(PTX)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床，并取得了良好的臨床效果。但是，目前應(yīng)用于臨床的中草藥有效成分藥仍較少，因此，從中草藥中研發(fā)新的抗腫瘤藥成為惡性腫瘤治療

2、的重要課題之一。 山豆根作為一種傳統(tǒng)的中草藥，具有清火、解毒、消腫、止痛之功效。有關(guān)其抗腫瘤作用有較多的報(bào)道，如用山豆根治療肝癌、食道癌、肺癌、白血病等由來(lái)已久?，F(xiàn)代藥理研究證明山豆根具有廣泛的藥理活性。先后證明山豆根水提物灌服或注射對(duì)多種實(shí)驗(yàn)性腫瘤有抑制作用，其水提物和醇提物均能抑制多種腫瘤生長(zhǎng)，能抑制體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞的增殖。因此，陜西山豆根抗腫瘤活性及作用機(jī)制的研究有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。 方法： 1、MTT法

3、測(cè)定山豆根提取物對(duì)Eca-109細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。 ①實(shí)驗(yàn)組：加入不同濃度的山豆根提取物； ②陽(yáng)性對(duì)照組：加入長(zhǎng)春新堿； ③空白對(duì)照組：加入等體積的生理鹽水。 每個(gè)濃度設(shè)四個(gè)平行孔，作用于Eca-109細(xì)胞后，測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，計(jì)算出IC<,50>值。同時(shí)用MTT法繪制山豆根提取物作用于Eca～109細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，設(shè)空白對(duì)照組。以上實(shí)驗(yàn)各重復(fù)3次，求平均值。 2、通過(guò)光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡、H

4、E染色法對(duì)細(xì)胞形念進(jìn)行系列觀察，利用流式細(xì)胞儀及瓊脂糖凝膠電泳法觀察Eca-109細(xì)胞的周期變化及細(xì)胞凋亡。 結(jié)果： 1、山豆根提取物對(duì)Eca-109細(xì)胞的增殖抑制作用 1.1 山豆根提取物列Eca-109細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。且抑制率有明顯的劑量依賴性，P均<0.05。 1.2 山豆根提取物處理Eca-109細(xì)胞的IC<,50>為17.27±2.21ug/ml。實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組OD值的差異均有統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)意義，與陽(yáng)性對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。 1.3 從生長(zhǎng)曲線來(lái)看，兩種濃度的山豆根提取物(30ug/ml，20ug/ml)處理Eca-109細(xì)胞7d，每天三組兩兩相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 1.4 山豆根提取物對(duì)細(xì)胞周期的影響。山豆根處理Eca-109細(xì)胞48h后與空白對(duì)照組比較，細(xì)胞周期發(fā)生明顯變化，且呈劑量依賴關(guān)系，并看到凋亡峰。 2 山豆根提取物誘導(dǎo)Eca-109細(xì)胞凋亡的作用山豆根提取物20ug/ml作用于Eca-1