百合對鹽脅迫的生理反應及轉S6PDH基因植株的抗鹽性鑒定.pdf

1、鹽脅迫對植物的傷害機理已有很多報道，但對觀賞植物方面報道甚少，百合屬鹽敏感型花卉，對百合生理研究也僅局限于高溫脅迫和切花保鮮生理方面的探討。因此，研究百合鹽脅迫反應及其耐鹽性，在理論和應用方面都具有重要意義。本研究以麝香百合組培苗為材料，一方面以細胞膜透性、脯氨酸含量、抗氧化酶活性及抗氧化劑含量為測定指標，探討它們的動態(tài)變化及鹽脅迫下作為抗鹽性評價指標的可行性；另一方面進行了S6PDH基因轉百合的研究，獲得百合轉基因(SSPDH)抗性植

2、株，為抗鹽機理的研究和抗鹽良種的培育提供科學的理論依據(jù)。本研究主要研究結果如下： (1)百合組培苗對鹽脅迫的生理反應經實驗得出8 g/L的NaCl濃度為百合組培苗的耐鹽性閾值，用8 g/L的NaCl處理百合組培苗，結果表明，其根系和葉片丙二醛(MDA)含量及電導率均較對照明顯升高，且根系MDA含量低于葉片，但脯氨酸(Pro)含量變化規(guī)律不明顯；隨鹽脅迫時間延長，超氧化物岐化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)

3、和抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性均呈先升后降的趨勢，但根系酶活性變化幅度明顯小于葉片；同時鹽脅迫處理還降低了百合葉片和根系中ASA含量，但根系ASA含量下降幅度小于葉片。這些結果說明，與葉片相比，百合根系耐鹽性更強；丙二醛(MDA)．含量及電導率均可作為百合抗鹽性評價的穩(wěn)定指標，而脯氨酸(Pro)不宜。 (2)百合轉6-磷酸山梨醇脫氫酶(S6PDH)基因植株的獲得A．以麝香百合組培苗葉片為基因轉化的受體材料，利用根癌農桿菌介導

4、法將$6PDH基因導入百合。通過對影響農桿菌介導百合遺傳轉化的幾個主要因素的探討，確定了各主要影響因素值：百合葉片在分化培養(yǎng)基上預培養(yǎng)3天，農桿菌浸染適宜濃度為Od～00為0.6，浸染時間10min，在共培養(yǎng)培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)3天，可以明顯提高百合的轉化率。以50mg/LKan濃度作為篩選麝香百合葉片抗性芽的選擇壓力。 B．對抗性篩選出的40株麝香百合苗進行PCR檢測，發(fā)現(xiàn)有6棵株系擴增出目標條帶。在10g/LNaCI脅迫3天后，通

5、過對該6個株系S6PDH酶活性的測定，測得株系轉7和轉9酶活性：轉7為57.34 umrnol NADPH/g/FWh，轉9為11.50 umrnol NADPH/g/FWh，初步證明外源基因已整合到百合基因組中。 (3)百合轉S6PDH基因植株的抗鹽性鑒定對PCR檢測出的6棵陽性植株進行的相關的生理指標測定，發(fā)現(xiàn)只有轉7株系表現(xiàn)出明顯的抗性規(guī)律：隨著鹽脅迫(10 g/L NaCl)時間的延長，轉7株系葉片與對照(非轉化苗)電導