外周血T細(xì)胞免疫功能與乙肝慢性化的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：分析乙型肝炎病毒(HBV)感染患者不同時(shí)期外周血T細(xì)胞表面共刺激分子CD28、CTLA-4、PD-1、Tim-3的表達(dá)量和T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-6、IFN-γ的水平,探討其外周血T細(xì)胞免疫功能與乙肝慢性化的相關(guān)性。
　　方法：第一部分采用流式細(xì)胞術(shù)和定量PCR等技術(shù)測定42例慢性乙型肝炎(CHB)、30例乙型肝炎后肝硬化(LC)、30例肝癌(HCC)患者及30例健康對(duì)照(NC)外周血T細(xì)胞表面共刺激分子CD28、

2、CTLA-4、PD-1、Tim-3的表達(dá)量及T淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值,并結(jié)合乙肝病毒DNA(HBV DNA)載量、乙型肝炎e抗原(HBeAg)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)等檢測結(jié)果作綜合分析。
　　第二部分采用ELISA檢測42例CHB、30例LC、30例HCC患者及30例NC血清中IL-4、IL-6、IFN-γ的水平,并結(jié)合HBV DNA載量、HBeAg和ALT等檢測結(jié)果作綜合分析。
　　結(jié)果：第一部分CD4+CD28+組間表達(dá)量以

3、 NC組為最高[1213.95(994.95~1608.27)],以 LC組為最低[542.91(316.53~884.85)],有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( H=34.358,P<0.001);CD8+CD28+組間表達(dá)量以CHB組為最高[355.29(195.93~503.37)],以LC組為最低[122.37(57.51~207.48)],有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(H=37.229,P<0.001);CD4+CTLA-4+組間表達(dá)量以NC組為最高[653.

4、7(527.91~757.44)],以LC組為最低[204.06(90.69~411.27)],有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(H=23.765,P<0.001);CD8+PD-1+組間表達(dá)量以CHB組為最高[18.06(4.14~36.21)],以LC組為最低[4.47(2.16~10.68)],有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( H=12.055,P=0.007);CD4+Tim-3+組間表達(dá)量以CHB組為最高[380.64(123.48~723.75)],以 LC組為

5、最低[145.95(78.33~272.73)],有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( H=9.480,P=0.024);CD8+Tim-3+組間表達(dá)量以 CHB組為最高[145.95(78.33~272.73)],以HCC組為最低[8.31(3.69~12.96)],有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(H=33.647,P<0.001)。相關(guān)性分析顯示:CD8+T細(xì)胞PD-1表達(dá)量與ALT濃度(r=0.690,P<0.01)、HBV DNA載量(r=0.730,P<0.01)均

6、呈顯著正相關(guān);CD8+T細(xì)胞Tim-3的表達(dá)量與HBV DNA載量(r=0.578,P<0.01)呈顯著正相關(guān);CD8+T細(xì)胞PD-1與Tim-3的表達(dá)量也呈一定的正相關(guān)(r=0.363,P<0.01)。
　　第二部分 IL-4、IFN-γ、IL-6表達(dá)水平組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(H值分別為:58.63、26.62、47.29,P值均<0.01)。經(jīng)兩兩比較顯示:三種分子的表達(dá)水平在CHB、LC和HCC組均顯著高于NC組(P<0.

7、05);IL-4表達(dá)水平在CHB組顯著高于LC、HCC兩組(P<0.05);IL-6表達(dá)水平在HCC組顯著高于CHB、LC兩組(P<0.05);與NC組相比,IFN-γ/IL-4在CHB、LC和HCC組呈顯著下降(H=9.63,P<0.05)。相關(guān)性分析顯示:IL-4水平與HBV DNA載量呈顯著正相關(guān)(r=0.757,P<0.001);IFN-γ水平與HBV DNA載量、ALT濃度呈不同程度的負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.786、-0.71

8、3,P值均<0.001);三種細(xì)胞因子在乙肝慢性化患者血清中的濃度與HBeAg未見明顯的相關(guān)性(P>0.05)。
　　結(jié)論：1.乙肝慢性化患者T細(xì)胞表面共刺激分子CD28、CTLA-4、PD-1、Tim-3的表達(dá)量均出現(xiàn)了不同程度的改變,尤其是PD-1、Tim-3分子與HBV DNA載量和ALT濃度呈不同程度的相關(guān)性。提示在乙肝慢性化過程中伴隨著CD28、CTLA-4、PD–1、Tim–3分子的表達(dá)量異常,尤其是對(duì)PD–1、Tim

9、–3這兩個(gè)分子表達(dá)量的監(jiān)測能更好地反映乙肝慢性化患者的T細(xì)胞免疫功能。
　　2.血清T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-6、IFN-γ水平的檢測結(jié)果提示在乙肝慢性化患者體內(nèi)存在Th2型細(xì)胞占優(yōu)勢的狀態(tài),這對(duì)疾病的治療和療效的觀察提供了很好的依據(jù)。IL-6的水平在HCC組顯著升高,這為接下來研究肝癌的發(fā)病機(jī)制提供了一定的線索。
　　3.T細(xì)胞表面共刺激分子CD28、CTLA-4、PD-1、Tim-3的表達(dá)量、血清T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因