乳腺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞的捕獲及細(xì)胞內(nèi)雌激素受體的檢測(cè).pdf

1、乳腺癌引起死亡的主要原因是癌癥的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。乳腺癌腫瘤細(xì)胞易進(jìn)入血液循環(huán),經(jīng)過一系列復(fù)雜機(jī)制形成轉(zhuǎn)移灶,循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells,CTCs)的檢測(cè)有助于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤的微轉(zhuǎn)移、監(jiān)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)、評(píng)估療效及預(yù)后。乳腺癌的一個(gè)重要生物學(xué)指標(biāo)是細(xì)胞內(nèi)雌激素受體(Estrogen Receptor,ER)水平,腫瘤細(xì)胞內(nèi)雌激素受體水平可以用來判斷能否采用內(nèi)分泌療法,CTCs中雌激素受體的存在狀態(tài)與初始腫瘤細(xì)胞可能不同

2、,如果初始腫瘤組織呈ER陰性的病人CTCs中ER呈陽性,病人也可能受益于內(nèi)分泌療法。
　　論文建立了捕獲CTCs的微流控芯片法以及觀測(cè)捕獲細(xì)胞中ER分布情況的免疫組織化學(xué)技術(shù)?；诖朔N微流控芯片的捕獲與檢測(cè)方法,具有試劑消耗少、高通量、分析過程自動(dòng)化、分析速度快、易于集成化等優(yōu)點(diǎn)。論文主要包括三個(gè)部分,內(nèi)容如下:
　　第一章緒論概述了CTCs的捕獲與檢測(cè)方法、ER檢測(cè)方法、檢測(cè)意義及它們與腫瘤的關(guān)系。重點(diǎn)綜述了微流控芯片捕獲

3、檢測(cè)CTCs的方法及其研究進(jìn)展。
　　第二章建立了一種 CTCs微流控芯片捕獲方法?？股掀ぜ?xì)胞粘附分子(Epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)的抗體能夠特異性識(shí)別細(xì)胞表面的 EpCAM,在微流控芯片通道中修飾抗EpCAM抗體,當(dāng)CTCs經(jīng)過芯片通道時(shí),可被通道內(nèi)修飾的抗EpCAM抗體特異性捕獲。實(shí)驗(yàn)對(duì)芯片表面抗體修飾條件、進(jìn)樣流速、進(jìn)樣方式等進(jìn)行了優(yōu)化,比較了微柱、彎道、螺旋三種芯片結(jié)構(gòu)對(duì)

4、人乳腺癌細(xì)胞(Michigan Cancer Foundation-7,MCF-7)的捕獲效率。在芯片直接包被抗體、抗體孵育3 h、注射泵流速為10μL/min的條件下,微柱結(jié)構(gòu)的微流控芯片捕獲細(xì)胞效率最高。
　　第三章論文采用免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)和免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)分別觀測(cè)微流控芯片捕獲的MCF-7細(xì)胞中雌激素受體分布情況。免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù):采用甘氨酸-鹽酸緩沖溶液將微流控芯片捕獲的細(xì)胞洗脫至酶標(biāo)板孔內(nèi),采用抗ER抗體(ant

5、i-Estrogen Receptor, anti-ER)孵育MCF-7細(xì)胞,依次加入酶標(biāo)二抗及底物顯色,定性分析細(xì)胞中ER的分布情況,結(jié)果顯示MCF-7細(xì)胞中含有ER,可定性判別表達(dá)量多少,但無法清楚地觀測(cè)該受體在細(xì)胞內(nèi)具體的表達(dá)分布。免疫熒光結(jié)合激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)原位觀測(cè)芯片中捕獲細(xì)胞內(nèi)ER分布情況的方法:采用異硫氰酸熒光素(Fluorescein Isothiocyanate,FITC)標(biāo)記anti-ER,合成FITC-an