氟對體外培養(yǎng)綿羊成骨細(xì)胞Bcl-2和Bax基因表達的影響.pdf

1、為探討氟化物在氟中毒所致骨相損害中的毒性作用，本研究以2～3月齡胎綿羊顱蓋骨為材料，采用酶完全消化法分離成骨細(xì)胞，通過形態(tài)觀察(Giemsa染色)和鈣化結(jié)節(jié)(茜素紅法)染色鑒定成骨細(xì)胞，并進行傳代培養(yǎng)；從體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞中提取總。RNA，經(jīng)RT-PCR擴增Bcl-2和Bax基因的部分序列，PCR產(chǎn)物連接pGEM-T Easy載體，轉(zhuǎn)化進感受態(tài)細(xì)胞DH5α，經(jīng)克隆、藍白斑篩選、質(zhì)粒酶切鑒定后，將陽性菌液送交測序公司測序以再次進行驗證：利

2、用實時熒光定量PCR檢測不同濃度NaF對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞Bcl-2和Bax基因表達的影響。結(jié)果表明： 1、成功擴增出bcl-2和bax基因的部分序列；引物特異性高，可進行后續(xù)的熒光定量PCR工作。 2、1.0×10<'-5>mol/L NaF組Bcl-2基因表達水平較對照組高，其他組Bcl-2表達水平均比對照組低；各NaF濃度組Bax基因表達量均比對照組高，且5.0×10<'-4>mol/L組最高：除1.0×10<'-5