用代謝組學(xué)方法篩選鼻咽癌診斷治療標(biāo)志物.pdf

1、目的： 運(yùn)用基于氣相色譜，質(zhì)譜聯(lián)用的代謝組學(xué)方法分析鼻咽癌患者血清中內(nèi)源性代謝物的變化，尋找鼻咽癌相關(guān)診斷標(biāo)志物。在此基礎(chǔ)上觀察這些鼻咽癌患者放療過程中代謝物的變化，尋找其與鼻咽癌治療的關(guān)系，從而為鼻咽癌的早期診斷和發(fā)病機(jī)制研究提供新的策略。 方法： 1.研究對象的納入：選取體檢結(jié)果正常的10例健康人作為正常對照組；選取符合納入標(biāo)準(zhǔn)的10例初診鼻咽癌患者作為實(shí)驗(yàn)組。 2.標(biāo)本采集：采集10例正常人靜脈血，

2、分離并收集血清；分別采集實(shí)驗(yàn)組10例鼻咽癌患者在放療前、放療第1周、第3周、第5周、第7周及放療后3月復(fù)查時(shí)的靜脈血，分離并收集血清。 3.GC-MS檢測：對收集到的血清標(biāo)本采用三甲基硅烷化衍生，進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）檢測，分離并鑒定血清標(biāo)本中的內(nèi)源性代謝物。 4.數(shù)據(jù)分析：采用主成分分析（principal component an

3、alysis，PCA）、偏最小二乘-判別分析（partial least squares-discriminant analysis，PLS-DA）兩種常用的多元數(shù)據(jù)分析方法和常規(guī)t檢驗(yàn)對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 結(jié)果： 1.通過GC-MS檢測分析，分離鑒定出鼻咽癌相關(guān)的25種血清內(nèi)源性代謝物，這些物質(zhì)是乳酸、2-酮基異己酸、丙氨酸、α-羥基丁酸、β-羥基丁酸、尿素、磷酸、亮氨酸、甘油、異亮氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、焦谷氨酸、

4、苯丙氨酸、α-甘油磷酸、酪氨酸、十六酸、亞油酸、油酸、硬脂酸、花生四烯酸、甘油十六酸酯、甘油硬脂酸酯、膽固醇。 2.PCA、PLS-DA進(jìn)行多變量數(shù)據(jù)分析提示，實(shí)驗(yàn)組初診鼻咽癌患者血清代謝譜與正常對照組有明顯差異；鼻咽癌患者放療前后代謝譜無明顯差異。 3.PCA對正常對照組、實(shí)驗(yàn)組放療前和放療后3月的患者血清代謝譜分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組鼻咽癌患者放療前、后代謝譜與正常對照組均存在差異，但鼻咽癌患者放療前后代謝譜無明顯差異。

5、 4.通過t檢驗(yàn)對鼻咽癌患者25種血清內(nèi)源性代謝物與正常對照組比較，發(fā)現(xiàn)14種代謝物存在顯著差異，其中乳酸、丙氨酸、α-羥基丁酸、β-羥基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸和甘油十六酸酯11種代謝物在鼻咽癌患者血清中含量增加；2-酮基異己酸、亞油酸、油酸3種代謝物在鼻咽癌患者血清中含量減少。 5.觀察14種有顯著性差異的代謝物在放療過程中的動(dòng)態(tài)改變，其中有8種代謝物（2-酮基異己酸、α-羥基丁酸、β

6、-羥基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、亞油酸、甘油十六酸酯）有向正常組轉(zhuǎn)歸的趨勢。 結(jié)論： 1.鼻咽癌患者與正常健康人血清內(nèi)源性代謝譜存在顯著差異：乳酸、丙氨酸、α-羥基丁酸、β-羥基丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸和甘油十六酸酯11種代謝物含量顯著增加；2-酮基異己酸、亞油酸、油酸3種代謝物含量減少。提示在鼻咽癌的形成過程中，由于外界和內(nèi)源性多種致癌因素的作用，導(dǎo)致鼻咽癌患者血清代謝譜的變化。