潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型的建立及腸寧方的防治作用初探.pdf

1、目的：建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，研究中藥復(fù)方腸寧湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織中MDA、SOD及血清中SIgA和IgG表達(dá)的影響，并探討中藥對(duì)防治潰瘍性結(jié)腸炎可能的作用機(jī)制，為腸寧湯的臨床應(yīng)用和進(jìn)一步開發(fā)提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 方法： 健康SD大鼠若干只，隨機(jī)分為4組：A組(中藥治療組)、B組(西藥治療組)、C組(生理鹽水組)、D組(空白對(duì)照組)。其中A、B、C組采用復(fù)合法造成潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，造模完成后每日給與常規(guī)飲食，

2、不與任何干預(yù)，觀察2周?？瞻讓?duì)照組造模前后均予常規(guī)飲食，不給任何干預(yù)。造模成功后，A組按體重給予腸寧湯水煎劑灌胃；B組灌服SASP溶液，C組給予生理鹽水灌胃；以上灌胃均每日一次，共治療4周。D組不給任何干預(yù)。 標(biāo)本采集分兩次進(jìn)行：第一次：造模完成后，治療開始前一天，大鼠禁食不禁水24小時(shí)后，隨機(jī)抽取A、B、C組大鼠各10只，D組6只，摘眼球取血6ml，置于預(yù)先標(biāo)記好的試管中做SIgA、IgG檢測，采血后脫頸椎處死，立即打開腹腔，

3、截取距肛門以上6～8cm病變處結(jié)腸，沿縱軸中線一分為二，投入到事先準(zhǔn)備好的裝有4％多聚甲醛固定液的小瓶中，4℃保存。其中一份常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察；另一分留做組織勻漿，測SOD及MDA。第二次采集標(biāo)本：治療滿4周，實(shí)驗(yàn)結(jié)束前一天記錄大鼠體重，大鼠禁食不禁水24小時(shí)后，所有大鼠均摘眼球取血，取血后處死，剖腹取結(jié)腸。方法及處理同第一次標(biāo)本采集。 結(jié)果： 1.腸寧湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠一般狀況的影響治療2周后，A

4、組進(jìn)食量開始增加，大便性狀好轉(zhuǎn)，未再見粘液膿血便，但部分大鼠仍可見稀便；B組進(jìn)食量無明顯增加，粘液膿血便減少，部分大鼠仍有稀糊狀大便。治療4周后，A組大鼠未再出現(xiàn)稀便，活動(dòng)正常，皮毛恢復(fù)光澤，體重明顯增加；B組大便性狀明顯好轉(zhuǎn)，活動(dòng)正常，皮毛光澤，體重增加。C組治療2周后大便性狀、進(jìn)食量等無明顯改善，體重進(jìn)一步下降；至4周后，仍見部分大鼠大便呈稀糊狀，并有精神倦怠、反應(yīng)遲鈍、皮毛疏松無光澤等表現(xiàn)。組大鼠一般狀況良好，體重明顯增加。

5、 2.腸寧湯對(duì)UC大鼠結(jié)腸粘膜損傷指數(shù)(CMDI分)的影響治療前A、B、C三組大鼠CMDIq[分)較D組顯著升高(P<0.01)；治療后，A、B兩組CMDI(分)顯著降低，與D組比較無明顯差異(P>0.05)；與C組比較有顯著差異(P<0.05) 3.病理結(jié)構(gòu)觀察治療前，結(jié)腸標(biāo)本HE染色顯示：A、B、C三組粘膜及粘膜下層高度充血、水腫，有糜爛和潰瘍形成，局部見壞死。大量炎性細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞浸潤，腺體”中杯狀細(xì)胞顯著減少。治療后

6、A、B兩組粘膜充血水腫消失，糜爛和潰瘍基本愈合，殘存潰瘍有明顯修復(fù)性改變，如粘膜上皮修復(fù)，肉芽組織增生等。炎性細(xì)胞浸潤亦有所緩解。C組無明顯變化。 4.腸寧湯對(duì)UC大鼠結(jié)腸組織中MDA、SOD表達(dá)的影響各組大鼠中，A組和B組大鼠結(jié)腸組織中MDA含量均顯著降低，與C組比較有極顯著差異(P<0.01)；中藥組同時(shí)能明顯提高結(jié)腸組織中SOD含量，與西藥組、生理鹽水組比較均有顯著差異(P<0.05)。 5.腸寧湯對(duì)UC大鼠血清I

7、gG、SIgA的影響造模后，A、B、C三組大鼠血清中IgG、SIgA較D組顯著上升(P<0.05)；用藥治療后，A組和B組的SIgG、SIgA含量較c組顯著減少(P<0.01)，A組與B組比較，血清中SIgA、IgG含量無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 采用2,4-二硝基氯苯+乙酸聯(lián)合建模法，既克服了DNCB病程短、自愈性強(qiáng)的缺點(diǎn)，也克服了乙酸法不具有免疫反應(yīng)模型特征的缺點(diǎn)，又同時(shí)保留了二者癥狀、組織學(xué)改變與人類U

8、C相似的優(yōu)點(diǎn)，是一種較理想的UC模型。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：腸寧湯方能明顯降低結(jié)腸組織的丙二醛(MDA)含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性；顯著降低血清中及SIgA、IgG含量，可明顯改善腸粘膜的超微結(jié)構(gòu)，有效修復(fù)UC大鼠損傷的結(jié)腸黏膜。初步證明了氧自由基誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、免疫異常在UC發(fā)病機(jī)理中起重要作用，揭示腸寧湯治療UC的部分機(jī)理可能是通過消除組織中的氧自由基，抑制組織中脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，提高組織中SOD的活性、改善免疫異常反應(yīng)而