肉種雞場(chǎng)主要種源性疫病的流行情況研究.pdf

1、禽類種源性疾病(Disease of avian embryo)是一類由多病原引起的綜合性疾病，可造成禽胚發(fā)育受阻，胚胎死亡，孵化率降低，肉雞增重減慢、胴體降級(jí)和廢棄增多等現(xiàn)象，給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)重大經(jīng)濟(jì)損失。 2005年3月份以來(lái)，山東某規(guī)?；瘡娜怆u集團(tuán)公司(飼養(yǎng)30萬(wàn)套肉種雞，共分6個(gè)分場(chǎng))三個(gè)父母代肉種雞分場(chǎng)的種雞群所產(chǎn)種蛋孵化時(shí)出現(xiàn)明顯的胚胎死亡、孵化率降低、弱雛增多，雛雞出現(xiàn)呼吸道癥狀，飼養(yǎng)到30天左右時(shí)，大腸桿菌及新城疫病

2、毒等的感染率明顯升高，出現(xiàn)雞只生長(zhǎng)發(fā)育遲緩等現(xiàn)象。其他分場(chǎng)未出現(xiàn)類似情況，由此推測(cè)該病與種雞群有關(guān)。為了進(jìn)一步探討引起該規(guī)?；N雞場(chǎng)種源性疫病的原因，本研究通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查及病原學(xué)檢查，并對(duì)其主要病原進(jìn)行了PCR檢測(cè)，為肉種雞場(chǎng)從源頭凈化該類疫病提供理論依據(jù)。 本研究共分3部分： 一、規(guī)?；N雞場(chǎng)種源性疫病病原學(xué)研究山東省某規(guī)?；瘡娜怆u集團(tuán)公司(集種雞場(chǎng)、孵化場(chǎng)、商品雞場(chǎng)及肉品加工于一體)的種雞場(chǎng)現(xiàn)存養(yǎng)從肉種雞30萬(wàn)套，

3、6個(gè)分場(chǎng)，各雞場(chǎng)呈地區(qū)分布，相距很遠(yuǎn)。2005年3月份以來(lái)，其孵化場(chǎng)出現(xiàn)胚胎死亡、弱雛增多，孵出的雛雞30d左右出現(xiàn)免疫應(yīng)答不良、生長(zhǎng)緩慢等癥狀。通過(guò)對(duì)該大型從父母代肉種雞場(chǎng)中的三個(gè)分場(chǎng)產(chǎn)蛋雞及其所產(chǎn)種蛋孵出的ld商品雛雞、30"-40d商品雞的血清抗體檢測(cè)，J亞型禽白血病病毒(ALV-J)、雞傳染性貧血病病毒(CIAV)的平均陽(yáng)性率分別為24.33％、5.00％，雞白痢(Pullorosis)、雞敗血支原體(MG)、滑液囊支原體(Ms

4、)、雞大腸桿菌(E.coli)和禽波氏桿菌(Bordetellaavium)的平均陽(yáng)性率分別為13.59％、12.69％、5.97％、19.62％和6.72％，從死亡雞胚、肉仔雞弱雛和死雛、商品育成雞等內(nèi)臟器官進(jìn)行病原學(xué)檢查，結(jié)果主要分離到大腸桿菌(36.00％)、沙門氏菌(24.73％)、支原體(19.53％)和禽波氏桿菌(12.33％)4種病原菌及Alv-J、CIAV兩種病毒。結(jié)果表明造成該病的主要原因是由大腸桿菌、沙門氏菌、支原體

5、、禽波氏桿菌及ALV-J、CIAV共感染種雞后，由種蛋垂直傳播到雞胚、雛雞造成的。二、主要免疫抑制病病原的分子生物學(xué)調(diào)查當(dāng)雞群中存在免疫抑制性病毒的感染時(shí)，雞群將對(duì)其它病毒或細(xì)菌變得易感，而且感染的癥狀、病變不典型，并造成免疫失敗。本研究通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查與病原學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)該場(chǎng)存在蛋傳遞性免疫抑制性病毒(ALV-J、cIAV)的感染。為了解該場(chǎng)是否存在蛋傳遞性病毒與其他免疫抑制性傳染因子的多重感染，本研究將采取的肉仔雞弱雛和死胚、商品育成

6、雞等的臟器(胸腺、、肝、脾、法氏囊、關(guān)節(jié)液及骨髓等)，分別按常規(guī)方法提取組織DNA與RNA，通過(guò)四重PCR方法檢測(cè)CIAV、MDV、REV、ALV-J，通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)IBDV和VAV，結(jié)果僅檢測(cè)到ALV-J和CIAV的存在，陽(yáng)性率分別為9.50％和6.50％，這一結(jié)果顯示，ALV-J和CIAV感染是導(dǎo)致該雞場(chǎng)發(fā)生免疫抑制病的主要病因之一。 三、J亞群禽白血病病毒核衣殼蛋白p27基因的克隆與測(cè)序J亞群禽白血病病毒(Sub

7、group J of Avian leukosis virus，ALV-J)是90年代初由英國(guó)鑒定出來(lái)的禽白血病病毒(ALV)新的亞群，’主要引起肉雞的骨髓瘤白血病。近年來(lái)該病毒在世界范圍內(nèi)迅速傳播。我國(guó)于1999年首先在肉用型雞群中分離鑒定出了ALV-J的中國(guó)株(杜巖，崔治中等，1999)，并通過(guò)接種1日齡雛雞發(fā)現(xiàn)了一株急性轉(zhuǎn)化型毒株。此后，又在中國(guó)分離出了更多的毒株(張志，崔治中等，2002)。 病原學(xué)研究結(jié)果表明J亞群禽白

8、血病是造成從父母代肉種雞種源性疫病的主要病因之一(分離率為24.33％)，為進(jìn)一步研究其分子生物學(xué)特性，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)已報(bào)道的ALV-J前病毒基因組gag P27序列設(shè)計(jì)了一對(duì)引物，通過(guò)RT-’PCR方法擴(kuò)增出與報(bào)道相同的720bp基因片段，將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到pMD 18-T載體中，轉(zhuǎn)化受體菌TG1，酶切鑒定陽(yáng)性克隆，并對(duì)陽(yáng)性克隆測(cè)序和分析，與已發(fā)表的ALV-J前病毒株序列進(jìn)行比較。結(jié)果該片段編碼序列與國(guó)內(nèi)寧夏分離株(NX0101)的同源性達(dá)