我國(guó)南海相似蜂海綿相關(guān)微生物多樣性及活性產(chǎn)物研究.pdf

1、海綿是最原始的低等多細(xì)胞動(dòng)物，主要分布于海洋環(huán)境，其特殊的濾食和生存方式使之成為大量微生物聚集的場(chǎng)所，還從海綿中發(fā)現(xiàn)了大量的生物活性物質(zhì)。海綿相關(guān)微生物尤其是微生物新種也被陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，并分離到許多具有藥理活性的微生物代謝產(chǎn)物。本課題致力于將分離培養(yǎng)技術(shù)與分子生物學(xué)手段（RFLP和核糖體rRNA序列分析）相結(jié)合，研究我國(guó)南海相似蜂海綿相關(guān)微生物多樣性，同時(shí)從可培養(yǎng)的微生物中篩選可應(yīng)用于創(chuàng)新藥物研究的活性產(chǎn)物，已取得如下進(jìn)展：
　　

2、1.調(diào)查了相似蜂海綿相關(guān)可培養(yǎng)真菌多樣性
　　 利用三種不同培養(yǎng)基：海水YPD、海水PDA和Marine Agar從海綿內(nèi)部組織勻漿中分離培養(yǎng)得到45株真菌，經(jīng)過rDNA-ITS序列測(cè)定、BLAST比對(duì)和分子系統(tǒng)學(xué)分析，最終將它們歸屬于2門（子囊菌門和擔(dān)子菌門）、8目、12屬和16種，其中6株有可能為首次發(fā)現(xiàn)的新種。上述菌株有待于進(jìn)一步的分類鑒定。
　　 2.調(diào)查了相似蜂海綿相關(guān)可培養(yǎng)細(xì)菌和未培養(yǎng)細(xì)菌的多樣性
　　

3、 采用四種不同的培養(yǎng)基：Marine Agar、海水LB、海水高氏1號(hào)和高氏1號(hào)固體培養(yǎng)基，分離培養(yǎng)得到350株細(xì)菌，經(jīng)RFLP分析，得到89個(gè)RFLP型，再通過16SrDNA序列測(cè)定、BLAST比對(duì)和分子系統(tǒng)學(xué)分析，最終將這些細(xì)菌歸類為38種。另外，通過構(gòu)建16S rRNA基因（rDNA）文庫(kù)、RFLP分析、DNA測(cè)序等方法分析了海綿相關(guān)未培養(yǎng)細(xì)菌的種群，共得到32個(gè)互不相同的序列，分別表征不同細(xì)菌菌株。
　　 3.對(duì)可培養(yǎng)

4、微生物進(jìn)行了藥理活性篩選，得到多株能產(chǎn)生藥理活性物質(zhì)的菌株
　　 將分離得到的真菌和細(xì)菌，分別采用GC和TSB培養(yǎng)基25℃發(fā)酵培養(yǎng)7天。真菌發(fā)酵物用乙酸乙酯提取和濃縮得浸膏，用三種腫瘤細(xì)胞株人腸癌HCT-8細(xì)胞，人肝癌Bel-7402細(xì)胞和人肺癌A549細(xì)胞進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選；用枯草芽孢桿菌63501進(jìn)行抗菌活性篩選；用BACE進(jìn)行抗衰老活性篩選；用α-葡萄糖苷酶抑制模型和脂肪酶抑制模型等體外模型進(jìn)行抗糖尿病活性篩選。初篩得