我國(guó)部分地區(qū)致新生仔豬腹瀉大腸桿菌的生物學(xué)特性.pdf

1、大腸桿菌是造成新生仔豬腹瀉(Neonatal diarrhea，ND)重要的病原體。為了弄清我國(guó)部分養(yǎng)豬地區(qū)致新生腹瀉大腸桿菌的生物學(xué)特性，從江蘇、江西、遼寧、福建、安徽、山東、浙江、河南、廣東和上海等10個(gè)省市臨診上疑似新生仔豬腹瀉的直腸棉拭及病死豬的十二指腸和腸系膜淋巴結(jié)作病料分離到大腸桿菌1073株。通過(guò)玻板凝集和試管凝集試驗(yàn)，除270株未能定型、73株自凝外，測(cè)定出730個(gè)分離株的血清型，這些分離株覆蓋了107個(gè)血清型，其中以0

2、101、0107、020、0149、09、093、023、08、091、01和011等11個(gè)血清型為主，共419株，占定型菌株的57.4％，為我國(guó)部分地區(qū)致新生仔豬腹瀉大腸桿菌的常見血清型，同時(shí)我國(guó)部分地區(qū)致仔豬腹瀉大腸桿菌O血清型的多樣性趨勢(shì)也得到了證實(shí)。 應(yīng)用多重PCR方法對(duì)1073株大腸桿菌分離株四種毒素(STa、STb、LT、Stx．2e)基因進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，攜帶毒素基因的大腸桿菌共有122株，毒素基因檢出率達(dá)11.

3、4％。4種毒素基因(STa、STb、LT、Stx-2e)分別檢出24株、102株、39株和2株。其中包括七種毒素類型，以STb<'+>、STb<'+>LT<'+>和STa<'+>三種毒素類型為主，分別占毒素基因陽(yáng)性菌株的48.4％(59/122)、30.3％(37/122)和15.6％(19/122)。應(yīng)用兔回腸結(jié)扎試驗(yàn)和斷奶仔豬小腸結(jié)扎試驗(yàn)對(duì)分離株的產(chǎn)腸毒素的能力進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4株腸毒素基因檢測(cè)陽(yáng)性的分離株均具備產(chǎn)生一種或兩種腸毒

4、素的能力，而毒素基因陰性的大腸桿菌分離株不具備產(chǎn)腸毒素的能力，由此表明我們建立的多重PCR方法對(duì)大腸桿菌毒素基因的檢測(cè)是可靠的，可用于大腸桿菌毒素類型的快速檢測(cè)。根據(jù)本試驗(yàn)測(cè)定的毒素基因類型可將122株毒素基因陽(yáng)性大腸桿菌分為ETEC、VTEC/ETEC和VTEC三類。其中ETEC檢測(cè)出120株，占新生仔豬腹瀉病例的98.4％(120/122)，VTEC、VTEC/ETEC各檢出1株，這些數(shù)據(jù)表明，ETEC是我國(guó)部分地區(qū)致新生仔豬腹瀉的

5、最重要的病原菌。 本試驗(yàn)應(yīng)用玻板凝集試驗(yàn)對(duì)1073株大腸桿菌分離株進(jìn)行5種黏附素(F4、F5、F6、F18和F41)檢測(cè)，結(jié)果表明：有152株大腸桿菌分離株表達(dá)一種或多種黏附素，檢出率達(dá)14.2％(152/1073)，5種黏附素(F4、F5、F6、F18和F41)分別檢出55株、48株、45株、7株、47株，單獨(dú)表達(dá)一種黏附素的有111株，表達(dá)兩種或兩種以上黏附素的有41株。本次試驗(yàn)共檢測(cè)出十四種黏附素類型，其中以F4<'+>、

6、F6<'+>、F5<'+>F41<'+>、F5<'+>和F41<'+>五種黏附素類型為主，分別檢出44株、34株、21株、15株和13株。結(jié)合本試驗(yàn)對(duì)分離株O血清型的檢測(cè)結(jié)果，分析O血清型與毒素類型和黏附素類型之間的相關(guān)性。結(jié)果表明：122株毒素基因陽(yáng)性大腸桿菌分離株的主要血清型為O149、O107、O91、O93和O11等。其中STb<'+>大腸桿菌的血清型達(dá)24種，主要有：O107、O11、O98和O15等，O149主要見于(89.

7、2％)STb<'+>LT<'+>大腸桿菌；152株表達(dá)黏附素的大腸桿菌分離株覆蓋了37種O抗原型，前6種O血清型為O149、O107、O101、O11、09和O93。毒素基因檢測(cè)陽(yáng)性同時(shí)表達(dá)黏附素的80株分離株表現(xiàn)出19種毒力因子組合形式，其中以STb<'+>LT<'+>/F4<'+>、STb<'+>/F5<'+>F41<'+>、STb<'+>/F4<'+>、STb<'+>/F5<'+>和STb<'+>/F6<'+>五種組合形式最常見，

8、27株STb<'+>LT<'+>/F4<'+>大腸桿菌的O血清型全為0149，說(shuō)明0149/STb<'+>LT<'+>/F4<'+>型大腸桿菌是我國(guó)致新生仔豬腹瀉流行菌株。 通過(guò)對(duì)所有1073個(gè)分離株毒力島基因進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，16．4％(176/1073)的分離株irp2和fyua基因擴(kuò)增陽(yáng)性。176株HPI<'+>大腸桿菌分離株覆蓋31個(gè)血清型，前9種血清為O101、O23、O107、O91、O20、O8、O118、O11和O3

9、8。對(duì)1073個(gè)分離株的LEE (ler和eaeA)的PCR檢測(cè)，2.7％(29/1073)的分離株ler和eaeA基因擴(kuò)增陽(yáng)性。10株let、eaeA、irp2和fyuA基因擴(kuò)增都為陽(yáng)性，7株為O91，1株為O139，1株為O38，1株未定型。29株LEE<'+>分離株中有48.3％(14/29)的分離株STa<'+>檢測(cè)陽(yáng)性，但不表達(dá)黏附素；5株為O91，3株為0107，1株為09，1株為04，1株為0111，2株為未定型，1株自凝