胰島素與β-淀粉樣蛋白寡聚體的共同作用對(duì)磷酸化環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分
　　 不同濃度β-淀粉樣蛋白寡聚體對(duì)磷酸化環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白的影響及機(jī)制
　　 目的：
　　 探討不同濃度的β淀粉樣蛋白（amyloid beta，Aβ）寡聚體（Aβ-derived diffusible ligands，ADDLs）的對(duì)磷酸化環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白的影響及機(jī)制。
　　 方法：
　　 0.5μmol/L,1μmol/L,1.5μmol/L,2μmol/L,2.

2、5 μmol/L,3μmol/L的Aβ1-42寡聚體分別作用于體外培養(yǎng)的PC12細(xì)胞(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞)3h,6h,12h,24h,36h和48h,western blot檢測(cè)鈣蛋白酶（calpain）的激活程度,蛋白激酶A的催化亞基（catalytic subunit of cAMP-dependent kinase，PKA-C）和磷酸化環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（phosphorylated cAMP response el

3、ement binding protein，pCREB）的蛋白表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 所有濃度的ADDLs均導(dǎo)致pCREB的下降（P<0.05），但均未影響PKA-C的含量
　　 （P>0.05）。0.5μmol/L,1μmol/L,1.5μmol/L的ADDLs導(dǎo)致pCREB的下降與calpain的激活無關(guān)，而2μmol/L,2.5 μmol/L,3μmol/L的ADDLs導(dǎo)致pCREB的下降與calp

4、ain激活相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 不同濃度ADDLs通過不同毒性通路導(dǎo)致pCREB下降：高濃度的ADDLs通過激活calpain，而低濃度ADDLs則可能通過其他途徑，但兩者均未通過影響PKA-C的含量來降低pCREB水平。
　　 第二部分
　　 胰島素與β-淀粉樣蛋白寡聚體的共同作用對(duì)磷酸化環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白的影響
　　 目的：
　　 探討胰島素與不同濃度的β淀粉樣蛋白（am

5、yloid beta，Aβ）寡聚體（Aβ-derived diffusible ligands，ADDLs）的共同作用對(duì)磷酸化環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白的影響。
　　 方法：
　　 選取0.5μmol/L和2μmol/L的ADDLs分別與100nmol/L和1μmol/L的胰島素共同作用于體外培養(yǎng)的PC12細(xì)胞(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞)12h,western blot檢測(cè)鈣蛋白酶（calpain）的激活程度,蛋白激酶A

6、的催化亞基（catalytic subunits of cAMP-dependent kinase，PKA-C）和磷酸化環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（phosphorylated cAMP response element binding protein，pCREB）的蛋白表達(dá)變化，并與胰島素單獨(dú)作用，ADDLs單獨(dú)作用時(shí)進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果：
　　 （1）胰島素單獨(dú)作用于PC12細(xì)胞時(shí)，無論大小劑量，與對(duì)照組相比，對(duì)

7、calpain激活無影響（P>0.05），在約處理30分鐘時(shí)有短暫的pCREB水平升高（P<0.05），之后pCREB迅速回落至正常水平。
　　 （2）不同濃度的ADDLs作用與PC12細(xì)胞：見前述。
　　 （3）胰島素與ADDLs共同作用時(shí)：0.5μmol/L和2μmol/L ADDLs分別與100nmol/L和1μmol/L胰島素共同作用12h。與0.5μmol/L和2μmol/L ADDLs單獨(dú)作用12h相比，

8、100nM胰島素的共同作用對(duì)calpain激活和pCREB水平無影響（P>0.05）；與0.5μmol/L ADDLs共同作用時(shí)，1μM胰島素能部分恢復(fù)pCREB的下降（P<0.05）,對(duì)calpain激活無影響（P>0.05）；與2μmol/L ADDLs共同作用時(shí)，1μM胰島素加劇了calpain的激活（P<0.05）與pCREB的下降（P<0.05）。
　　 （4）PKA-C的含量在各組均無變化（P>0.05）。