超聲介導(dǎo)載多烯紫杉醇的聚乳酸-羥基乙酸微球治療荷人肝癌裸鼠的實驗研究.pdf

1、目的：制備一種載多烯紫杉醇的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)緩釋微球，考察其理化性質(zhì)、體外釋放及藥物穩(wěn)定性，并探討其在超聲引導(dǎo)下瘤內(nèi)注射對荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤的治療作用及相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：⑴采用溶劑揮發(fā)法制備載多烯紫杉醇的PLGA緩釋微球，應(yīng)用掃描電鏡(SEM)檢測微球的表面形態(tài)、粒徑，高效液相色譜(HPLC)法檢測包封率、載藥率及體外藥物釋放情況，氣相色譜檢測二氯甲烷的殘留量，5、15、25kGy60Co三種劑量輻照滅菌，

2、改良寇氏法測定載藥微球小鼠皮下注射的半數(shù)致死量。⑵建立人肝癌BEL-7404裸鼠皮下移植瘤模型，隨機(jī)分為模型組、空白微球組、多帕菲腹腔內(nèi)注射組、多帕菲瘤內(nèi)注射組、多烯紫杉醇微球瘤內(nèi)注射低劑量和高劑量組共6組，每組15只，在超聲引導(dǎo)下給予相應(yīng)的治療；⑶治療后每周超聲觀察各組腫瘤的大小、實質(zhì)回聲及血供情況；⑷給藥3周后，每組隨機(jī)抽取5只裸鼠行腫瘤超聲造影，而后處死并剝離腫瘤稱質(zhì)量，計算抑瘤率；⑸腫瘤行病理組織學(xué)檢查，免疫組織化學(xué)法檢測微血管

3、密度(MVD)，實時熒光定量PCR檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、血管生成素2(Ang2)和堿性成纖維生長因子(bFGF)基因表達(dá)的差異。⑹每組余下裸鼠繼續(xù)觀察荷瘤生存時間。
　　 結(jié)果：①采用溶劑揮發(fā)法可制備平均粒徑為23.1μm的載藥微球，PLGA與多烯紫杉醇的投料比為100mg/5mg時可獲得較佳的包封率(96.3％)和載藥率(4.82％)。載藥微球在體外21天累積釋放藥物達(dá)82.5％，無明顯突釋效應(yīng)，并且包裹在微球內(nèi)的

4、多烯紫杉醇穩(wěn)定性明顯提高。三種劑量60Co輻照后均未見短小芽孢桿菌生長。微球內(nèi)二氯甲烷殘留量為0.026％，符合國家藥典規(guī)定。②多烯紫杉醇PLGA微球小鼠皮下注射的半數(shù)致死量為483.6mg/kg，明顯高于多烯紫杉醇注射液的52.7mg/kg。③治療3周后，模型組和空白微球組腫瘤持續(xù)生長，超聲檢查示腫瘤實質(zhì)回聲欠均勻，血流信號十富；多烯紫杉醇治療各組的腫瘤生長都受到不同程度的抑制，其中多烯紫杉醇微球瘤內(nèi)注射高劑量組腫瘤生長抑制最顯著，抑

5、瘤率為66.01％，均明顯高于多帕菲腹腔內(nèi)注射組(34.65％)、多帕菲瘤內(nèi)注射組(35.62％)和多烯紫杉醇微球瘤內(nèi)注射低劑量組(48.37％)。④治療3周后，超聲造影示多烯紫杉醇微球瘤內(nèi)注射高劑量組腫瘤僅見周邊少許增強(qiáng)，實質(zhì)大部分呈充盈缺損改變；其余各組實質(zhì)內(nèi)仍可見不同程度的增強(qiáng)。⑤多烯紫杉醇微球瘤內(nèi)注射組病理學(xué)檢查示組織大片壞死，MVD和VEGF、bFGF及Ang2表達(dá)均低于其余各組。⑥生存分析結(jié)果顯示，治療15周后載藥微球組生存

6、率(70％)高于多帕菲腹腔內(nèi)注射組(30％)和瘤內(nèi)注射組(30％)具有統(tǒng)計學(xué)顯著性意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：采用溶劑揮發(fā)法可制備粒徑及分布適宜，分散良好的載多烯紫杉醇PLGA緩釋微球，包封率高，釋放周期可達(dá)3周，并能提高多烯紫杉醇的穩(wěn)定性；超聲引導(dǎo)瘤內(nèi)注射載多烯紫杉醇PLGA微球，可明顯提高多烯紫杉醇抗人肝癌療效，抑制腫瘤組織血管生成相關(guān)基因VEGF、bFGF和Ang2的表達(dá)，減少腫瘤新生血管生成，提高生存率，具有潛在