具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光特性的四苯基乙烯在細(xì)胞成像中的應(yīng)用及細(xì)胞毒性檢測.pdf

1、背景：熒光分子成像是利用熒光分子探針標(biāo)記特定的分子或細(xì)胞，顯示活體狀態(tài)下組織水平、細(xì)胞和亞細(xì)胞水平的分子，并對其生物學(xué)行為在影像方面進(jìn)行定性和定量研究的科學(xué)。
　　 （1）利用熒光分子探針成像具有靈敏度高、快捷方便、時間分辨率高、費(fèi)用低等諸多優(yōu)點(diǎn)
　　 （2）在生物學(xué)及醫(yī)學(xué)研究中已廣泛應(yīng)用。然而傳統(tǒng)熒光分子探針在使用中普遍存在的一個問題是：當(dāng)熒光官能團(tuán)聚集時易發(fā)生熒光減弱或淬滅的現(xiàn)象
　　 （3）,即當(dāng)發(fā)光分子在

2、聚集狀態(tài)下會發(fā)生發(fā)光減弱甚至不發(fā)光的現(xiàn)象。2001年Tang研究組發(fā)現(xiàn)了聚集誘導(dǎo)發(fā)光(aggregation-induced emission，AIE)現(xiàn)象，是指一類熒光生色團(tuán)在溶液狀態(tài)下微弱發(fā)光甚至不發(fā)光，而在固態(tài)或聚集狀態(tài)下熒光顯著增強(qiáng)的一種光物理現(xiàn)象
　　 （4）,意味著利用這類熒光基團(tuán)作為熒光探針相對于傳統(tǒng)熒光探針具有不可比擬的優(yōu)勢。但目前關(guān)于具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光特性的熒光分子探針在細(xì)胞染色的部位以及對細(xì)胞的活性及凋亡的影響

3、等方面尚未見研究。在具有聚集誘導(dǎo)發(fā)光性質(zhì)的化合物中，四苯基乙烯(tetraphenylethene，TPE)及其衍生物在聚集狀態(tài)時能發(fā)出很強(qiáng)的藍(lán)色熒光
　　 (5)，其發(fā)光性能優(yōu)良，合成較為簡便，以TPE及其衍生物作為探針是AIE現(xiàn)象在生物檢測領(lǐng)域應(yīng)用的一個重要組成部分。
　　 目的：研究TPE的細(xì)胞染色部位，并分別檢測其對腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的生長活性及細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法：
　　 （1）使用Ea

4、gle極限必需培養(yǎng)基（Eagle’s Minimal Essential Medium，MEM）培養(yǎng)人宮頸癌細(xì)胞株HeLa；
　　 （2）Dulbecoo改良的Eagle培養(yǎng)基（Dulbecoo’s modification of Eagle’s Medium，DMEM）培養(yǎng)人乳腺成纖維細(xì)胞（Human breast fibroblasts，HMF）；
　　 （3）采用McMurry反應(yīng)合成TPE，加入二甲基亞砜（Dim

5、ethyl sulfoxide，DMSO）中使其呈完全溶解狀態(tài)，與固態(tài)TPE對比熒光強(qiáng)度，檢測其AIE特性；
　　 （4）TPE完全溶解后稀釋成不同濃度，加入培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞；
　　 （5）不同濃度處理的細(xì)胞在相同的放大倍數(shù)和曝光時間下對比熒光強(qiáng)度，采用NIS Elements F軟件處理圖像；
　　 （6）WST-8法檢測細(xì)胞生長活性；
　　 (7）Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋

6、亡；
　　 （8）所有計(jì)量數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件檢測。
　　 結(jié)果：TPE完全溶解于DMSO后在紫外光的激發(fā)下未見熒光，而固態(tài)顆?？梢奣PE發(fā)出藍(lán)色熒光，持續(xù)暴露在光和空氣中后，仍可見強(qiáng)熒光，隨TPE濃度增加熒光強(qiáng)度增強(qiáng)；TPE用于細(xì)胞染色后，紫外線激發(fā)下細(xì)胞質(zhì)呈藍(lán)色熒光，細(xì)胞核不著色，熒光強(qiáng)度與TPE濃度成正比；經(jīng)TPE處理后，腫瘤細(xì)胞系和正常細(xì)胞系的生長活性均在90％以上；流式細(xì)胞儀檢測HeLa細(xì)胞和HMF