尿液中DD3mRNA檢測(cè)對(duì)前列腺癌早期診斷意義的研究.pdf

1、目的：我國前列腺癌的發(fā)病率呈顯著增長態(tài)勢(shì)。PSA是目前診斷前列腺癌最重要的腫瘤標(biāo)記物，但PSA只具有前列腺組織特異性，而無腫瘤特異性，其檢測(cè)假陽性率比較高，且PSA正常者也不能排除前列腺癌。DD3基因特異性地高表達(dá)于人類前列腺癌組織和轉(zhuǎn)移壞死灶中，本研究旨在論證它是否是一種可替代PSA的、早期診斷前列腺癌以及判斷預(yù)后的標(biāo)志物。 材料和方法 收集非前列腺疾病病人、前列腺良性增生和前列腺癌患者的尿液標(biāo)本沉淀；提取其中的總RN

2、A后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)；用β-actin作為看家基因，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，確認(rèn)DD3的PCR產(chǎn)物，同時(shí)對(duì)DD3mRNA進(jìn)行半定量測(cè)定：用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)對(duì)DD3mRNA進(jìn)行相對(duì)定量測(cè)定：最后用SPSSl3．0分析相關(guān)數(shù)據(jù)。 結(jié)果 一、對(duì)于指標(biāo)DD3灰度比值，非前列腺疾病病人與前列腺良性增生患者之間的比較無差異，與前列腺癌患者比較有差異。而對(duì)于指標(biāo)DD3相對(duì)定量值，三類患者的比較均有顯著性差異，前列腺癌患者DD3m

3、RNA相對(duì)定量值是前列腺良性增生患者14.1倍、非前列腺疾病病人的24.1倍。 二、各個(gè)血清PSA水平級(jí)別之間，DD3mRNA相對(duì)定量值有差異。對(duì)PSA位于4-10 ng/ml檢測(cè)灰區(qū)的兩類患者進(jìn)行比較，tPSA、fPSA、DD3mRNA灰度比值的比較均無明顯差異，而DD3mRNA相對(duì)定量值的比較則有顯著性差異。 三、各個(gè)Gleason評(píng)分／分化程度中，DD3mRNA灰度比值和DD3mRNA相對(duì)定量值均有明顯差異，分化程

4、度越低，DD3mRNA灰度比值和DD3mRNA相對(duì)定量值越高。DD3灰度比值、相對(duì)定量值與Gleason評(píng)分均呈顯著性正相關(guān)；DD3灰度比值與前列腺體積呈正相關(guān)，但相關(guān)性不明顯。 四、運(yùn)用受試者工作特征曲線分析可得，各指標(biāo)PSA、F/T、DD3灰度比值、DD3相對(duì)定量值的曲線下面積分別為：0.744、0.788、0.921、0.942。DD3相對(duì)定量值的檢驗(yàn)效能最大，灰度比值次之。 討論 研究表明，PSA在0-4

5、ng/ml其假陽性率為25％，而假陰性率可達(dá)38％-48％；此外，幾個(gè)多中心臨床試驗(yàn)顯示，DRE能夠發(fā)現(xiàn)10％-21％經(jīng)PSA測(cè)定PSA<4.0ng/ml的PCa患者：在血清PSA>4.0ng/ml的人群中，穿刺活檢診斷為前列腺癌者只有25％-30％。 de Kok等研究發(fā)現(xiàn)，與良性組織相比，前列腺癌組織中DD3的含量增加了34倍，即使組織中前列腺癌細(xì)胞的含量較少(≤10％)，DD3也能夠清晰準(zhǔn)確地表達(dá)。臨床上，RISH法、RT

6、-PCR技術(shù)可在前列腺組織穿刺細(xì)胞學(xué)活檢和體液(如血液、精液、尿液和前列腺按摩液)檢測(cè)中應(yīng)用。運(yùn)用實(shí)時(shí)定量的RT-PCR技術(shù)，能準(zhǔn)確量化地檢測(cè)DD3，它具有診斷前列腺癌和判斷其預(yù)后的價(jià)值。相比較而言，尿液中DD3的檢測(cè)標(biāo)本更易獲得、更容易為患者接受。 前列腺癌患者尿液中DD3mRNA相對(duì)定量值是前列腺良性增生患者14.1倍、非前列腺疾病病人的24．1倍，在三類患者中的差別遠(yuǎn)比血清PSA明顯。運(yùn)用ROC分析發(fā)現(xiàn)，DD3mRNA相對(duì)

7、定量值的曲線下面積最大(0.942)，也就是說在綜合考慮靈敏度和特異度的情況下，DD3mRNA相對(duì)定量值這一指標(biāo)在鑒別前列腺良性增生患者和前列腺癌方面的能力最強(qiáng)。這些結(jié)果說明，DD3mRNA相對(duì)定量值可以在前列腺癌的篩檢和早期鑒別診斷中發(fā)揮作用。Gleason評(píng)分是西方國家中應(yīng)用最為普遍的病理分級(jí)，研究發(fā)現(xiàn)Gleason分級(jí)能很好的預(yù)測(cè)患者的預(yù)后情況。 本研究發(fā)現(xiàn)，24例前列腺癌患者中，各個(gè)Gleason分級(jí)之間DD3mRNA灰

8、度比值和相對(duì)定量值比較均有顯著性差異，且Gleason分?jǐn)?shù)與DD3mRNA灰度比值和相對(duì)定量值呈明顯的正相關(guān)，由此推斷對(duì)DD3mRNA的定量測(cè)定可能起到指導(dǎo)前列腺癌患者預(yù)后的作用。此外，在前列腺癌患者中，各個(gè)tPSA分級(jí)之間DD3mRNA相對(duì)定量值有明顯差異；對(duì)PSA位于4-10 ng/ml檢測(cè)灰區(qū)的前列腺良性增生和前列腺癌患者進(jìn)行分析得到，tPSA、fPSA、DD3mRNA灰度比值的比較均無明顯差異，而DD3mRNA相對(duì)定量值的比較有

9、顯著性差異；這說明DD3mRNA相對(duì)定量值的測(cè)定能在前列腺良性增生和前列腺癌患鑒別診斷中發(fā)揮作用。對(duì)于DD3mRNA的分子生物學(xué)特性和功能還未完全了解；將尿液中DD3mRNA的檢測(cè)應(yīng)用于篩查和早期鑒別診斷時(shí)，檢測(cè)方法沒有規(guī)范化，界值還未確定；如何將DD3基因檢測(cè)與前列腺癌的臨床分期和病理分級(jí)相聯(lián)系，以提高其判斷治療后轉(zhuǎn)歸的能力。還都有待于將來基于大規(guī)模人群的進(jìn)一步深入研究。 結(jié)論 尿液中DD3mRNA的定量檢測(cè)可應(yīng)用于前