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文檔簡介
1、小麥條銹病是一種重要的世界性的小麥葉部病害,培育抗病品種是控制小麥條銹病的經(jīng)濟(jì)有效的途徑。然而,大面積推廣種植單一抗病品種又常常促使條銹菌新小種的產(chǎn)生和發(fā)展,而最終導(dǎo)致小麥品種抗病性的“喪失”,目前這一狀況已成為抗病品種應(yīng)用中突出的問題。目前,小麥與條銹菌互作的研究主要集中在形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)、遺傳學(xué)等方面,然而對于小麥與條銹菌互作的分子機(jī)理及事件仍不清楚。因此,開展對小麥與條銹菌互作關(guān)系的分子機(jī)理研究,揭示病原物和寄主互相的分子機(jī)
2、制,對于小麥抗條銹性的合理利用和小麥條銹病的可持續(xù)控制具有重要的理論和實(shí)際意義。 為了更全面地了解小麥與條銹菌非親和過程中所有基因的表達(dá)情況,全面揭示互作的分子機(jī)制,本研究以接種CY23生理小種后第16 h、24 h、36h和48h的水源11小麥葉片為建庫材料,提取各時間點(diǎn)的總RNA并等量混合,用SMART<'TM> cDNA Library Construction Kit首次構(gòu)建小麥條銹菌接種初期非親和互作的cDNA文庫。得
3、到原始文庫滴度1.2×10<'6> pfu/mL,擴(kuò)增文庫滴度2×10<'9> pfu/mL,重組率97%,插入片段在0.4 kb到3 kb之間。 對文庫隨機(jī)挑取5200多個克隆進(jìn)行單向測序,測序原始序列通過初步的如去載體序列、重復(fù)序列等處理后,共獲得1515條高質(zhì)量ESTs序列,CAP3聚類結(jié)果獲得494個Contigs和1021個獨(dú)立的ESTs。經(jīng)Blast比對分析,發(fā)現(xiàn)在所有的Unigenes中,未知功能蛋白和Blastx
4、比對后沒有顯著匹配的序列(nohits)共占46%,為最大類。功能已知的ESTs中,能量和代謝相關(guān)的基因?yàn)榈谝淮箢悾s占32%,其中與光合作用相關(guān)的基因,如1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)、葉綠體前體、葉綠素a/b結(jié)合蛋白,光合體系蛋白等在統(tǒng)計(jì)結(jié)果中出現(xiàn)的頻率最高;功能不確定或者不清楚地為第二類,約占22%;第三大類是編碼防衛(wèi)及抗病相關(guān)蛋白的基因,包括一些編碼誘導(dǎo)抗性蛋白、多種病程相關(guān)蛋白(PR蛋白)(包括多種蛋白酶
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