循環(huán)腫瘤細(xì)胞與肺癌TNM分期的相關(guān)性研究.pdf

1、本論文共分為三個(gè)部分,本研究的第一部分旨在研究循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)與肺癌TNM分期和腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)性。肺癌是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,其病死率居惡性腫瘤之首,發(fā)病率呈逐年上升趨勢。肺癌患者的5年生存率僅8％～15％。多數(shù)患者在病程中出現(xiàn)腦、骨、腎上腺、肝臟等遠(yuǎn)端器官轉(zhuǎn)移,嚴(yán)重影響患者的預(yù)后,而血液循環(huán)系統(tǒng)是實(shí)體腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的必要途徑之一,血液循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞具有與原發(fā)灶內(nèi)瘤細(xì)胞相似的基因遺傳學(xué)特征,有研究指出腫瘤的復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移可能與

2、腫瘤切除前CTCs的入血有關(guān),因此CTCs有望成為指導(dǎo)治療和判斷預(yù)后的敏感指標(biāo)。本研究旨在分析肺癌患者CTC水平與TNM分期、腫瘤標(biāo)志物和肺癌分類的相關(guān)性。我們以2010年8月至2010年12月在北京世紀(jì)壇醫(yī)院就診的42例肺癌患者作為研究對(duì)象,采集患者靜脈血標(biāo)本,應(yīng)用免疫磁珠陰性富集分離及細(xì)胞免疫熒光染色的方法,檢測靜脈血中CK18+/DAPI+/CD45-CTC計(jì)數(shù),同時(shí)檢測腫瘤標(biāo)志物Cyfra21-1、NSE、CA199、CA125

3、、CA153、CEA、AFP,并結(jié)合影像學(xué)、病理學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行TNM分期,對(duì)CTC和TNM分期、腫瘤標(biāo)志物之間的相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)T1期患者中,CTC計(jì)數(shù)以1～2為主(4/8,50％),而在T2～T4期的患者中,CTC計(jì)數(shù)以≥3為主(6/14,42.86％;5/8,62.5％;6/10,60％)。利用影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)有轉(zhuǎn)移即分期為M1的肺癌患者中,都可檢測出CTC。對(duì)于總的TNM分期,Ⅰ期患者的CTC計(jì)數(shù)以1～2為主(5/10,50

4、％),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者以CTC≥3為主(5/11,45.45％:6/11,54.55％;7/10,70％)。值得注意的是Ⅳ期肺癌患者均可檢測出CTC。與Cyfra21-1正常組患者相比,Cyfra21-1升高組的患者其CTC檢出陽性率增高(58.52％ vs.95.45％,P=0.013)。綜上所述,CTC計(jì)數(shù)與腫瘤大小、侵襲性以及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移具有一定的相關(guān)性,同時(shí)其與腫瘤標(biāo)志物 Cyfra21-1具有一定相關(guān)性。
　　 第二部分旨

5、在研究紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)和急性心肌梗塞(AMI)預(yù)后的相關(guān)性,AMI是臨床上常見的疾病之一,也是導(dǎo)致死亡的主要原因,在美國等發(fā)達(dá)國家,每年可有450,000人死于冠心病。心肌梗塞的預(yù)后差,首次發(fā)生AMI的男性患者病死率為16％,女性患者病死率為28％。紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)是測定紅細(xì)胞體積大小變異的一個(gè)參數(shù),為血常規(guī)檢測指標(biāo)之一。研究表明RDW與心力衰竭以及急性冠脈綜合癥等心血管疾病患者的預(yù)后具有相關(guān)性,但至今沒有RDW

6、與AMI患者心功能分級(jí)(killip分級(jí))之間的相關(guān)性研究,以此為著入點(diǎn),我們間接分析了RDW與AMI患者預(yù)后的相關(guān)性。對(duì)2006年12月-2009年12月入住協(xié)和醫(yī)院的345例AMI患者進(jìn)行回顧性分析,根據(jù)臨床癥狀和肺部有無啰音、啰音范圍和收縮壓進(jìn)行Killip分級(jí),檢測患者的RDW、血紅蛋白(Hb)、血細(xì)胞比容(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、BNP以及hs-CRP等指標(biāo)。分析Killip各級(jí)之間RDW的變化趨勢,同時(shí)對(duì)RDW與

7、BNP和hs-CRP之間的相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),KillipⅡ級(jí)及以上患者的RDW值明顯高于KillipⅠ級(jí)患者的RDW(13.75vs13.07,P<0.001),但KillipⅡ級(jí)、Ⅲ級(jí)及Ⅳ級(jí)之間RDW值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PⅡ/Ⅲ=0.498、PⅡ/Ⅳ=0.418、PⅢ/Ⅳ=0.817),KillipⅠ級(jí)患者的RDW值均位于參考范圍內(nèi)。RDW與BNP顯著相關(guān)(r=0.178,P<0.05),而與hs-CRP不具有相關(guān)性(r=0.

8、065,P>0.05)。在校正了年齡、性別、HGB、HCT和MCV等因素后,BNP仍可獨(dú)立預(yù)測RDW(R2=0.032,P<0.05)。綜上所述,我們的分析數(shù)據(jù)表明RDW與AMI患者心功能Killip分級(jí)具有一定的相關(guān)性,KillipⅠ級(jí)患者的RDW值顯著低于其他分級(jí)患者的RDW值,提示RDW與AMI患者的預(yù)后具有一定的相關(guān)性。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)RDW與BNP顯著相關(guān),因此作為一項(xiàng)簡單方便、經(jīng)濟(jì)快速的檢測指標(biāo),RDW可作為評(píng)估AMI患者預(yù)后

9、的新marker。
　　 本研究的第三部分旨在探討轉(zhuǎn)錄因子SALL4在白血病中的表達(dá)及其作用機(jī)制。有研究表明SALL4與造血發(fā)育和血液惡性腫瘤之間具有一定的相關(guān)性,本實(shí)驗(yàn)室前期研究從分子水平分析了SALL4在急性髓細(xì)胞白血病(AML)中的表達(dá)情況,比較了急性期AML患者、緩解期AML患者以及健康者的SALL4表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)急性期AML患者SALL4表達(dá)水平(69.01,17.20～120.28)明顯高于健康對(duì)照組(2.64,1.

10、35～5.41；P<0.01)和緩解期AML患者組(1.14,0.50-1.62；P<0.01)。同時(shí)利用RNA干擾技術(shù)對(duì)急性白血病細(xì)胞株THP-1中SALL4基因的表達(dá)進(jìn)行抑制,發(fā)現(xiàn)Wnt/β-Catenin信號(hào)通路的C-myc、Cyclin D1及β-Catenin基因的表達(dá)下調(diào),細(xì)胞凋亡率增加。在此基礎(chǔ)上,我們利用表達(dá)Sall4基因的慢病毒載體感染小鼠造血干細(xì)胞后,將其進(jìn)行異體移植,建立過表達(dá)SALL4基因的小鼠模型,通過觀察過表