注射性rhBMP-2-PVP緩釋液對糖尿病大鼠脛骨上段骨折愈合作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：
　　建立了合格的糖尿病大鼠模型后，再行建立右側(cè)脛骨上段骨折模型，術(shù)中通過對比性的注射生理鹽水、局部注射骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2、局部注射骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2和聚乙烯吡咯啉酮聯(lián)合制備的注射性rhBMP-2/PVP骨修復(fù)液態(tài)材料，對比性研究在糖尿病大鼠骨折愈合過程中，液態(tài)聚乙烯吡咯啉酮溶劑對骨形態(tài)發(fā)生蛋白的緩釋作用以及高血糖對骨折愈合的影響。
　　研究背景：
　　局部單純應(yīng)用BMP-2（bonemorphogeneti

2、c protein骨形態(tài)發(fā)生蛋白）后，在體內(nèi)很快就被相對應(yīng)的蛋白酶所降解，同時(shí)大量促骨質(zhì)愈合的相關(guān)因子顯示在糖尿病患者骨折局部的BMP-2是大幅度的少于健康人群，體外研究顯示：rhBMP-2在被液態(tài)的PVP（polyethlenepyrolindone聚乙烯吡咯啉酮）載體負(fù)載后，獲得了比較理想的緩釋效果。
　　材料和方法:
　　72只均為2月齡的健康雄性SD大鼠，這些SD大鼠共分為四組，其中把空白的實(shí)驗(yàn)對照組設(shè)為A組，即非糖

3、尿病實(shí)驗(yàn)對照組有18只，剩下的54只通過建立糖尿病模型后設(shè)為糖尿病大鼠組（STZ組），再隨機(jī)配組分為三組，其中B組：糖尿病實(shí)驗(yàn)對照模型組18只，C組：rhBMP-2組18只、D組：rhBMP-2/PVP組18只。四組組糖尿病大鼠均在分組成功后進(jìn)行右脛骨上段骨折手術(shù)，成為骨折模型，前后共飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)大鼠6周。實(shí)驗(yàn)時(shí)對rhBMP-2組予以術(shù)中腓腸肌肌注rhBMP-2溶液（含rhBMP-2為5mg/Kg），rhBMP-2/PVP組予以術(shù)中腓腸肌肌

4、注rhBMP-2/PVP復(fù)合緩釋溶液（含rhBMP-2為5mg/Kg、PVP100mg/Kg），糖尿病模型組及空白對照組予以手術(shù)術(shù)中腓腸肌肌注生理鹽水（等溶液容量），期間每周進(jìn)行血糖的監(jiān)測，并在骨折術(shù)后第2周、在第4周、第6周每組分別處死6只大鼠，分別進(jìn)行右下肢X線片閱片觀察評(píng)分和新生骨組織的HE染色、組織學(xué)染色、用特異性方法測定血清中的OC（ostepcalcin骨鈣素）表達(dá)、血清中的堿性磷酸酶（alkaline osphatase，

5、ALP）、及光鏡下觀察骨痂內(nèi)OB（osteoplast成骨細(xì)胞）數(shù)量，并描繪BMP-2釋放曲線圖。
　　結(jié)果：
　　骨折術(shù)后同一時(shí)間，X線片檢查結(jié)果示：各組局部的骨痂影均逐漸增加，其中A組新生骨痂量均多于B、C組，而均D組少，D組產(chǎn)生骨痂最多、愈合最理想。生化檢測指標(biāo)顯示：OC濃度結(jié)果顯示D組明顯高于其他三組，ALP濃度結(jié)果顯示D組ALP含量顯著高于各組。隨著骨修復(fù)的時(shí)間和程度的增大，局部產(chǎn)生的Ca含量也相應(yīng)的累積升高，含量

6、統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示D＞A＞C＞B。組織學(xué)切片結(jié)果觀察顯示： D組骨小梁成熟度和密度均高于其余三組。免疫組化染色后觀察示：Ki67指數(shù)（％）在術(shù)后的第4周達(dá)到峰值后成下降趨勢，各時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)顯示：D組峰值高于各組。蘇木精-伊紅染色光鏡下觀察顯示，C組OB數(shù)量明顯多于B組，略低于A組，明顯低于D組。
　　結(jié)論：
　　1. rhBMP-2及rhBMP-2/PVP緩釋液均能對糖尿病大鼠骨折處骨愈合起促進(jìn)作用。
　　2.PVP溶劑對rh