ADAM23在肺鱗癌細胞SK-MES-1增殖、侵襲、遷移中的作用及機制.pdf

1、背景與目的:肺癌是目前發(fā)達國家乃至全世界危害最為嚴重的惡性腫瘤之一，浸潤和轉(zhuǎn)移是肺癌患者死亡的主要原因。本課題組的前期研究表明:去整合素-金屬蛋白酶23(A Disintegrin And Metalloprotease23，ADAM23)在非小細胞肺癌中的表達與肺癌的惡性進展和轉(zhuǎn)移有關，但其具體分子機制仍未明確。
　　ADAM23屬于ADAM家族，該家族含有去整合素區(qū)，并與基質(zhì)金屬蛋白酶共享“金屬蛋白酶域”。這些分子可影響細胞-

2、細胞粘附、細胞遷移、增殖等多種生物學行為，同時ADAM23作為一種抑癌基因，其表達缺失與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。前期實驗表明，非小細胞肺癌中，ADAM23表達下調(diào)后αVβ3表達增高，二者可能在肺癌的浸潤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮協(xié)同作用。
　　上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)是胚胎發(fā)育的一個重要過程，但它在癌癥中的異常激活，是發(fā)生在惡性腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移過程中的早期事件。與浸潤轉(zhuǎn)移

3、相關的眾多信號通路中，PI3K/AKT信號通路可被整合素αVβ3激活促進腫瘤的生長、侵襲、遷移能力。有文獻報導，該信號通路的持續(xù)活化促進EMT的發(fā)生。AKT處在該信號通路的中心環(huán)節(jié)，活化的AKT在細胞生長、增殖、運動、細胞侵襲方面有重要作用。
　　本實驗發(fā)現(xiàn)，ADAM23表達下調(diào)后，可促進肺鱗癌細胞SK-MES-1的增殖、侵襲、遷移能力，同時pAKT表達上調(diào)，通過特異性阻斷PI3K后，研究細胞體外侵襲、遷移能力的變化。本實驗旨在探

4、討沉默ADAM23對肺鱗癌細胞SK-MES-1增殖、侵襲、遷移能力的影響及機制研究。
　　方法:(1)利用脂質(zhì)體介導的轉(zhuǎn)染技術，瞬時轉(zhuǎn)染ADAM23-siRNA-1、2、3和Negative control到肺鱗癌SK-MES-1細胞，同時未經(jīng)處理的SK-MES-1細胞作為空白對照，采用real time PCR方法檢測ADAM23 mRNA表達水平，篩選出抑制效果最佳的干擾片段;(2)瞬時轉(zhuǎn)染ADAM23-siRNA-3、Neg

5、ative control到SK-MES-1細胞，以未處理的SK-MES-1作為空白對照，采用western blot檢測三組細胞中TWSIT、E-cadherin、α-SMA、vimentin的蛋白表達;(3)采用MTT比色法檢測三組細胞的增殖能力;(4) transwell實驗檢測三組細胞的侵襲、遷移能力;(5)用western blot檢測三組細胞AKT、pAKT、αV的蛋白表達水平，并分析其與ADAM23基因的相關性;(6)以A

6、DAM23-siRNA-3處理后的SK-MES-1細胞為研究對象，將其分為三組，分別添加LY294002、DMSO，第三組不處理作空白對照，用western blot檢測AKT、pAKT、αV的表達水平;(7)用western blot檢測PI3K/AKT通路特異性抑制劑LY294002對TWSIT、E-cadherin、α-SMA、vimentin蛋白的影響;(8) transwell實驗檢測LY294002對細胞侵襲、遷移能力的影響

7、。
　　結果:(1) ADAM23-siRNA-1、2、3均可抑制ADAM23 mRNA的表達，其中3號片段干擾效果最好;(2)與空白及陰性對照組相比，瞬時轉(zhuǎn)染ADAM23-siRNA后，E-cadherin表達下調(diào)，α-SMA、vimentin、TWSIT表達升高;(3) ADAM23低表達組的細胞增殖能力明顯強于陰性對照及空白對照組(P＜0.05);(4)與空白及陰性對照組相比，ADAM23-siRNA處理組細胞的體外侵襲、遷

8、移能力明顯增強(P＜0.05);(5)與空白及陰性對照組相比，ADAM23-siRNA處理組AKT表達無明顯變化，pAKT、αV的表達均強于另兩組;(6) LY294002處理后，該組AKT表達降低，pAKT表達缺失，αV的表達無明顯變化;(7)LY294002處理后，該組E-cadherin表達上調(diào)，α-SMA、vimentin、TWSIT表達下調(diào);(8) LY294002處理后，該組細胞體外侵襲、遷移能力明顯下降(P＜0.05)。<