鈣池操縱性鈣內(nèi)流及其功能蛋白TRPC、ORAI和STIM1在人非小細胞肺癌中的表達研究.pdf

1、背景：肺癌是一種嚴重危害人類健康生命的重大疾病，其發(fā)病率及病死率居各類惡性腫瘤前列。新型診治措施的建立依賴于對肺癌病理機制的進一步研究和認識。鈣離子（Ca2+）是各種細胞增殖、分化、基因轉(zhuǎn)錄等生命活動的重要信使分子，由細胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣池(ER)排空信號所激活、細胞膜表面的鈣池操縱性鈣通道（SOCC）開放所形成的鈣池操縱性鈣內(nèi)流（SOCE）是非興奮細胞內(nèi)調(diào)節(jié)Ca2+穩(wěn)態(tài)平衡的重要途徑[1]。文獻報道[2] [3]，經(jīng)典瞬時受體電位通道蛋白（

2、TRPC）及鈣釋放激活鈣調(diào)節(jié)蛋白(CRACM，也稱ORAI)等家族成員TRPC1～7和ORAI1～3參與構(gòu)成SOCC?；|(zhì)相互作用蛋白分子1(STIM1)是感受和傳導鈣池排空信號、激活SOCC的重要信號分子。過去關于SOCE及其相關功能蛋白的研究主要集中在神經(jīng)系統(tǒng)、血液淋巴系統(tǒng)、心肺血管系統(tǒng)及泌尿系統(tǒng)，近期研究發(fā)現(xiàn)，SOCE的異常與肝癌、乳腺癌、前列腺癌等多種類型腫瘤的進展關系密切，但SOCE與肺癌發(fā)生和發(fā)展的關系還不清楚。
　　

3、 目的：研究人非小細胞肺癌（NSCLC）組織和細胞中SOCE，及其相關功能蛋白TRPC、ORAI及STIM1的表達情況，為將來深入探討它們在肺癌病理機制中的功能奠定基礎。
　　 方法：采用熒光定量PCR及蛋白質(zhì)免疫印跡技術檢測NSCLC組織及細胞中TRPC1～7、ORAI1～3、STIM1 mRNA和蛋白質(zhì)的表達情況。應用鈣熒光染料Fura-2，通過熒光顯微鏡鈣定量系統(tǒng)測量肺癌細胞中的鈣濃度。在用含環(huán)匹阿尼酸和尼非地平的無鈣生

4、理鹽溶液灌洗細胞后，通過監(jiān)測灌洗液中鈣濃度恢復所引起的細胞內(nèi)鈣濃度的增加對SOCE進行評估。
　　 結(jié)果：1.在已知的七個TRPC家族成員中，人NSCLC組織選擇性表達TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6 mRNA，它們的相對表達豐度為TRPC1?TRPC6>>TRPC3>TRPC4；不表達TRPC2、TRPC5和TRPC7 mRNA。2.與正常肺組織相比，各TRPC mRNA在肺癌組織中的表達水平呈現(xiàn)降低趨勢，其中T

5、RPC6 mRNA表達的降低具有統(tǒng)計學意義(P=0.009)。3.肺癌細胞主要表達TRPC1和/或TRPC6 mRNA，低表達TRPC3和TRPC4 mRNA，不表達TRPC2、TRPC5和TRPC7 mRNA。4.蛋白質(zhì)免疫印跡對NSCLC組織和細胞中高豐度表達的TRPC1和TRPC6 mRNA進行蛋白水平驗證，發(fā)現(xiàn)NSCLC組織和細胞中均表達TRPC1和TRPC6通道蛋白，在NSCLC組織中TRPC6蛋白表達水平明顯低于遠癌正常肺組

6、織(P=0.03)，TRPC1的表達與正常對照相比無差異。5.NSCLC組織表達ORAI1、ORAI2和ORAI3以及STIM1 mRNA，與正常肺組織相比呈上調(diào)趨勢，統(tǒng)計上無差異。6.熒光顯微鏡鈣測定系統(tǒng)在肺癌細胞系和原代肺癌細胞中均檢測到SOCE的存在。
　　 結(jié)論：本研究證明人肺癌細胞存在SOCE。人NSCLC組織選擇性表達TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6,主要表達TRPC1和TRPC6；NSCLC組織表達所